細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是離體方法中主要的一種,是從動(dòng)物體內(nèi)取出細(xì)胞,模擬體內(nèi)的生理環(huán)境,在無菌、適溫、豐富的營(yíng)養(yǎng)條件下,使離體細(xì)胞生存、生長(zhǎng)并維持結(jié)構(gòu)和功能的一門技術(shù)。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)是科學(xué)探究的基礎(chǔ),細(xì)胞實(shí)驗(yàn)服務(wù)可以提供包括細(xì)胞侵襲檢測(cè)、細(xì)胞劃痕檢測(cè)以及細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)等的研究。細(xì)胞體外培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)對(duì)于科學(xué)研究至關(guān)重要,然而在細(xì)胞培養(yǎng)中,常會(huì)因?yàn)椴贿m宜的環(huán)境條件以及不得當(dāng)?shù)牟僮鲗?dǎo)致細(xì)胞被污染。在細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中如何避免污染是一項(xiàng)很重要的工作,現(xiàn)在我們來看一下細(xì)胞體外培養(yǎng)中常見的污染種類,以及避免方法。
1、外源性污染
外源性污染中應(yīng)注意實(shí)驗(yàn)室內(nèi)空氣保持潔凈,定期清掃、紫外消毒,操作者嚴(yán)格按照無菌操作進(jìn)行。由于離體細(xì)胞對(duì)各種毒物都很敏感,所以細(xì)胞培養(yǎng)所用器材的清洗、消毒處理非常關(guān)鍵。
培養(yǎng)所用的物品器具要*清洗消毒,超凈臺(tái)的物品擺放要井然有序,避免反復(fù)燒烤已經(jīng)高溫滅菌的物品以及避免因細(xì)胞株種類過多而引起的細(xì)胞間交叉污染。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室的構(gòu)建也是各個(gè)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)服務(wù)公司*的實(shí)驗(yàn)室,實(shí)驗(yàn)室需要配備CO2培養(yǎng)箱、超凈工作臺(tái)/生物安全柜、純水系統(tǒng)以及液氮罐等設(shè)備,同時(shí)需要保證細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室的干凈與整潔。
2、支原體污染
支原體是一種沒有細(xì)胞壁的原核生物,大多呈不規(guī)則球狀或絲狀,由于它的直徑小(約為0.15-2 µm),而且形狀靈活,所以能逃過實(shí)驗(yàn)室常用的濾膜。在光學(xué)顯微鏡下支原體不可見,對(duì)培養(yǎng)基的需求有限,一般不會(huì)引起培養(yǎng)物混濁,因此支原體慢慢的殺細(xì)胞于無形之中。細(xì)胞被支原體污染后,其生長(zhǎng)繁殖和形態(tài)、代謝及功能、染色體及免疫細(xì)胞產(chǎn)量均會(huì)受到影響,支原體污染能夠消耗營(yíng)養(yǎng)物,促進(jìn)代謝積累,導(dǎo)致PH改變,誘導(dǎo)或抑制細(xì)胞因子表達(dá),并改變培養(yǎng)細(xì)胞的代謝、增殖特征以及形態(tài)。
據(jù)一些資料報(bào)道,支原體污染在細(xì)胞體外培養(yǎng)過程中發(fā)生率高達(dá)15%~80%。為了避免支原體污染的發(fā)生,對(duì)培養(yǎng)物進(jìn)行常規(guī)的支原體檢測(cè)非常重要,應(yīng)嚴(yán)格按照細(xì)胞培養(yǎng)操作程序進(jìn)行操作、確保適宜的環(huán)境條件、嚴(yán)格的無菌觀念操作、定期清潔消毒、任何培養(yǎng)用液使用前均進(jìn)行無菌檢查、只引進(jìn)來源可靠的細(xì)胞,同時(shí)一旦發(fā)現(xiàn)污染的細(xì)胞應(yīng)滅活棄之避免進(jìn)一步污染擴(kuò)散。美迪西提供細(xì)胞實(shí)驗(yàn)服務(wù),其生物部在分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、體外生物學(xué)和結(jié)構(gòu)生物學(xué)領(lǐng)域有豐富廣泛的經(jīng)驗(yàn)。從初的cDNA文庫構(gòu)建到藥物設(shè)計(jì),通過蛋白質(zhì)純化,結(jié)構(gòu)測(cè)定和分析測(cè)定,提供一套完整的生物學(xué)服務(wù)。
3、霉菌污染
霉菌污染也是細(xì)胞培養(yǎng)過程中常見的一個(gè)問題,如果細(xì)胞被霉菌污染后,在低倍鏡下可見乳白色的團(tuán)狀漂浮物,培養(yǎng)液無變化。高倍鏡下可見明顯的菌絲,細(xì)胞活力變差,生長(zhǎng)速度明顯變慢,甚至死亡。細(xì)胞被霉菌污染時(shí),若非價(jià)值很高的珍貴細(xì)胞一般選擇扔掉,且相關(guān)的容器也要做嚴(yán)格處理。有文獻(xiàn)報(bào)道,低速離心法可去除細(xì)胞培養(yǎng)中的霉菌污染,不僅實(shí)驗(yàn)條件簡(jiǎn)單,能*去除霉菌,且所用時(shí)間短.并能將不良反應(yīng)降至低程度。
細(xì)胞體外培養(yǎng)中常見的污染種類除了上述之外,還有真菌、病毒原蟲等污染,不管是何種類型的污染,總之在細(xì)胞體外培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中,預(yù)防污染的方法是良好的細(xì)胞培養(yǎng)技巧和正確的態(tài)度。同時(shí)在體外細(xì)胞培養(yǎng)時(shí),還需要主動(dòng)避免細(xì)胞實(shí)驗(yàn)對(duì)人的影響。實(shí)驗(yàn)人員需要注意一些操作細(xì)節(jié).如避免由于眼睛及皮膚長(zhǎng)時(shí)間暴露在紫外線下造成的損傷,同時(shí)避免由于誤照引起的電光性眼炎。紫外線燈在消毒時(shí)可產(chǎn)生刺激人體呼吸道黏膜的臭氧,臭氧過多時(shí)也會(huì)引起中毒反應(yīng),所以為避免損傷出現(xiàn)應(yīng)使用無臭氧紫外線燈或在消毒完30分鐘后再進(jìn)入超凈工作室操作。