細(xì)胞培養(yǎng)板的選擇和使用

細(xì)胞培養(yǎng)板的選擇和使用！
 
一、細(xì)胞培養(yǎng)板
細(xì)胞培養(yǎng)板作為培養(yǎng)細(xì)胞的一種常用和重要的工具，形狀、規(guī)格、用途多樣。
你是否也為如何選擇適合的培養(yǎng)板而迷茫？
你是否正為如何方便、正確使用培養(yǎng)板而苦惱？
你對(duì)如何處理培養(yǎng)板是否也有困惑？
對(duì)不同的培養(yǎng)板各有什么妙用你又有何體會(huì)？
 
二、細(xì)胞培養(yǎng)板的選擇
1）細(xì)胞培養(yǎng)板依底部形狀的不同可分為平底和圓底（U型和V型）；
2）培養(yǎng)孔的孔數(shù)有6、12、24、48、96、384、1536 孔等；
3）根據(jù)材質(zhì)的不同有Terasaki板和普通細(xì)胞培養(yǎng)板。具體選擇時(shí)根據(jù)培養(yǎng)細(xì)胞的類型、所需培養(yǎng)體積及不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩ā?/span>
三、平底和圓底（U型和V型）培養(yǎng)板的區(qū)別和選擇
1）貼壁細(xì)胞一般用平底培養(yǎng)板。
2）懸浮型細(xì)胞的培養(yǎng)一般用V型。
3）U型培養(yǎng)板亦多用于培養(yǎng)懸浮型細(xì)胞 。
4）V型培養(yǎng)板有時(shí)用做免疫學(xué)血凝集的實(shí)驗(yàn)。
四、不同型狀的板子自然有不同用途
平底的什么類型的細(xì)胞都可用，但當(dāng)細(xì)胞數(shù)目較少，如做克隆時(shí)，就用96孔平底板。
另外﹐做MTT等實(shí)驗(yàn)時(shí)﹐無(wú)論貼壁和懸浮細(xì)胞﹐一般均用平底板。
至于U或V型板﹐一般在某些特殊要求時(shí)才使用。如在免疫學(xué)方面﹐當(dāng)做兩種不同淋巴細(xì)胞混合培養(yǎng)時(shí)﹐需要二者相互接觸以刺激。因此﹐一般需要U型板﹐因細(xì)胞會(huì)由于重力的作用而聚集在一個(gè)很小的范圍內(nèi)，V型板的用途更少﹐一般用于細(xì)胞殺傷實(shí)驗(yàn)時(shí)﹐為了使效靶細(xì)胞緊密接觸﹐常使用V型板﹐但這種實(shí)驗(yàn)也可用U型板替代(加入細(xì)胞后﹐低速離心）。
如果是養(yǎng)細(xì)胞的話， 通常是運(yùn)用平底的， 另外要特別注意材質(zhì)， 標(biāo)示"Tissue Culture (TC) Treated"就是養(yǎng)細(xì)胞用的。
圓底的通常是拿來(lái)做分析， 化學(xué)反應(yīng)， 或是保存樣品用。因?yàn)閳A底比較好將液體吸得干凈， 如果用平底的就不好吸了。 不過(guò)， 如果你是要測(cè)吸光值的話， 一定要買平底的才行。
大部分細(xì)胞培養(yǎng)都用平底培養(yǎng)板，便于鏡下觀測(cè)、有明確的底面積、細(xì)胞培養(yǎng)液面高度相對(duì)一致，還便于MTT檢測(cè)。
圓底培養(yǎng)板主要用于同位素?fù)饺氲膶?shí)驗(yàn)，需要用細(xì)胞收集儀收集細(xì)胞的培養(yǎng)，如“混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)”等。
五、問(wèn)題集錦
問(wèn)：我看到培養(yǎng)板有4、6、12、24、48、96孔幾種規(guī)格 ，但不知道到底什么實(shí)驗(yàn)用哪種規(guī)格，請(qǐng)指教。
答：要根據(jù)你具體的實(shí)驗(yàn)要求，流式一般用6孔，MTT一般用96孔，細(xì)胞爬片一般用24孔等！要具體根據(jù)你實(shí)驗(yàn)來(lái)定！
問(wèn)：請(qǐng)問(wèn)哪位高手知道Terasaki板是什么培養(yǎng)板，與普通細(xì)胞培養(yǎng)板有什么區(qū)別？
答：Terasaki plate主要是用于晶體學(xué)研究，產(chǎn)品設(shè)計(jì)便于對(duì)晶體的觀察與結(jié)構(gòu)分析。
有兩種sitting 和handing drop兩種方法，兩種方法應(yīng)用產(chǎn)品的外形結(jié)構(gòu)也不同。
材料上選擇crystal class polymer ，特殊的材料有利觀察晶體結(jié)構(gòu)。
細(xì)胞培養(yǎng)板主要是PS材料。材料是treated sufface。便于細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)與伸展。當(dāng)然還有浮游細(xì)胞的生長(zhǎng)材料，同時(shí)還有l(wèi)ow binding surface，有關(guān)更多實(shí)驗(yàn)材料上的應(yīng)用與對(duì)材料的選擇。
問(wèn)：我想測(cè)吸光度用酶標(biāo)儀，用多孔細(xì)胞培養(yǎng)板行嗎？請(qǐng)問(wèn)酶標(biāo)板 多孔細(xì)胞培養(yǎng)板有什么區(qū)別？
答：用多空細(xì)胞培養(yǎng)板測(cè)吸光度肯定可以拉，我們經(jīng)常用它來(lái)做樣品的蛋白定量和MTT檢測(cè)。
區(qū)別：酶標(biāo)板一般要比細(xì)胞培養(yǎng)板貴，細(xì)胞板主要做細(xì)胞培養(yǎng)，但也可以用來(lái)測(cè)蛋白濃度；酶標(biāo)板包括包被板和反應(yīng)板，一般不能用做細(xì)胞培養(yǎng)，它主要做免疫酶聯(lián)反應(yīng)后的蛋白檢測(cè)，它需要更高的要求還需要特定的酶標(biāo)工作液。
如下是個(gè)用酶標(biāo)板檢測(cè)冠狀病毒IgM/IgG抗體例子
操作步驟
⒈加樣品：將標(biāo)本稀釋液100ul（或2滴）加到包被板內(nèi)（預(yù)留陰陽(yáng)性及空白對(duì)照2－5孔），將待檢血清用PBS或生理鹽水按1：20稀釋后取10ul加入反應(yīng)孔內(nèi)。
⒉加對(duì)照：加入陰性對(duì)照1－3孔，陽(yáng)性對(duì)照1孔，各100ul對(duì)照血清。空白對(duì)照1孔空置。
⒊溫育：將反應(yīng)板震蕩使樣品混勻后，置37℃溫箱或水浴反應(yīng)20分鐘。
⒋洗板：用蒸餾水將濃縮洗滌液15ml稀釋至300ml。（1）手洗：將反應(yīng)板孔內(nèi)容物傾出，將洗滌液注滿反應(yīng)孔，放置30秒鐘后用力甩去，如此重復(fù)5次后拍干。（2）機(jī)洗：5次，每孔注入洗滌液200ul或注滿，停留30秒鐘后吸盡拍干。
⒌加酶標(biāo)工作液：每孔加入100ul（或2滴）酶標(biāo)工作液，置37℃溫箱反應(yīng)20分鐘后，洗板5次，洗板操作同步驟4。
⒍顯色和終止反應(yīng)：將底物A、B液各50ul（或1滴）加到反應(yīng)孔內(nèi)，37℃避光顯色10分鐘。每孔加入終止液50ul（或1滴）混勻終止反應(yīng)。
 
結(jié)果判定
⒈酶標(biāo)儀設(shè)定波長(zhǎng)450nm，先用空白調(diào)零，然后測(cè)定各孔OD值；如果選用雙波長(zhǎng)測(cè)定，不必設(shè)置空白對(duì)照孔。
⒉當(dāng)陰性對(duì)照平均OD值小于0.08，陽(yáng)性對(duì)照（pc）OD值大于0.30時(shí)，說(shuō)明試劑盒有效且實(shí)驗(yàn)操作正確，否則應(yīng)當(dāng)重復(fù)試驗(yàn)。
⒊臨界值（CUT—OFF VALUE）＝0.15＋陰性對(duì)照平均（NC）OD值（當(dāng)陰性平均OD值小于0.05時(shí)，按0.05計(jì)算；當(dāng)陰性平均OD值大于或等于等于0.05時(shí)按實(shí)際值計(jì)算）。
⒋標(biāo)本OD值≤臨界值為陰性，標(biāo)本OD值>臨界值為陽(yáng)性。
常用不同培養(yǎng)板的孔底面積及推薦加液量：不同孔板所加培養(yǎng)液的液面都不宜太深，一般在2-3mm范圍，結(jié)合不同孔的底面積就可算出各培養(yǎng)孔的適宜加液量。若加液量過(guò)多會(huì)影響氣體（氧氣）交換，而且在搬動(dòng)過(guò)程中易溢出造成污染。具體所加細(xì)胞密度依實(shí)驗(yàn)的目的不同靈活掌握。