GIBCO胎牛血清、GIBCO血清價格
在細胞培養(yǎng)過程中,經(jīng)常加入5%-20%的胎牛血清,常使用的Gibco胎牛血 清濃度是10%。高濃度的血清可能改變細胞的基因表達譜,影響后續(xù)實驗的結(jié)果,我們在實驗中使用10%的Gibco美國 胎牛血清培養(yǎng)293T細胞,效果非常好。但是有些細胞也會使用5%的Gibco FBS或者20%的Gibco胎牛血清,要根據(jù)具體 細胞選擇合適的Gibco胎牛血清濃度。
Gibco胎牛血清保存方法
1、需要長期保存的血清必須儲存于-20℃ - 70℃ 低溫冰箱中。4℃冰箱中保存時間切勿超過1個月。切勿將血清在 37℃放置太久,否則血清會變得渾濁,同時血清中的有效成分會被破壞,而影響血清質(zhì)量。如果一次無法用完一瓶,可 將40~45ml分裝于無菌50ml離心管中。由于血清結(jié)冰時體積會增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前,必須預(yù)留一 定體積空間,否則易發(fā)生污染或玻璃瓶凍裂。
2、一般廠商提供的血清為無菌,無需再過濾除菌。如發(fā)現(xiàn)血清有懸浮物,則可將血清加入培養(yǎng)液內(nèi)一起過濾,切勿直接 過濾血清。
3、瓶裝血清解凍需采用逐步解凍法:-20℃ 至 -70℃ 低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室溫,待全 部溶解后再分裝,一般以50ml無菌離心管可分裝40~45ml。在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度 與成分均一,減少沈淀的發(fā)生。.切勿直接將血清從-20℃進入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝集而 出現(xiàn)沉淀。
4、熱滅活是指56℃, 30分鐘加熱已*解凍的血清.加熱過程中須規(guī)則搖晃均勻.此熱處理的目的是使血清中的補體 成分滅活.除非必須,一般不建議作此熱處理,因為熱處理會造成血清沉淀物顯著增多,而且還會影響血清的質(zhì)量.補體 參與反應(yīng)有:細胞毒作用, 平滑肌細胞收縮, 肥大細胞和血小板釋放組胺, 增強吞噬作用, 促進淋巴細胞和巨噬細胞 發(fā)生化學(xué)趨化和活化。
5、血清中的沉淀物 絮狀物:主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成,這些絮狀物不會影響血清本身 的質(zhì)量.可用離心3000rpm,5分鐘去除,也可不用處理。 顯微鏡下"小黑點":經(jīng)過熱處理過的血清,沉淀物 的形成會顯著增多。有些沉淀物在顯微鏡下觀察象"小黑點",常誤認為血清受污染。一般情況下,此小黑 點不會影響細胞生長,但如果懷疑血清質(zhì)量,則應(yīng)立即停止使用,更換另一批號的血清。
Gibco胎牛血清使用中遇到的常見問題總結(jié)
一、血清滅活問題。
1、問:加到培養(yǎng)基中的血清必須滅活嗎?
答:不是必須的,看做什么實驗了。
2、問:Gibco胎牛血清滅活是56℃ 30分鐘嗎?
答:如果用于培養(yǎng)大多數(shù)的腫瘤細胞,血清一般是不需要滅活的,這樣可以有效保存血清中的生長因子。 但是如果用于培養(yǎng)一些表面具有補體受體的細胞,如內(nèi)皮細胞,血清是需要滅活,一般是56℃,30min。
3、問:我要做滋養(yǎng)細胞培養(yǎng),胎牛血清要滅活嗎?
答:進口的一般都已滅活,國產(chǎn)的不一定,還是滅活一下再用較安全。
4、問:我用病毒上清轉(zhuǎn)染細胞,培養(yǎng)用的血清需要滅活嗎?因為血清中可能有些補體和抗體,是不是會影 響轉(zhuǎn)染?我想未滅活的血清中含些抗體補體可能會和病毒相結(jié)合,影響轉(zhuǎn)染,正確嗎?細胞是單核細胞白血病細胞, 病毒是病毒包裝細胞PT67收集的病毒上清。為什么要用無血清培養(yǎng)基加病毒孵育幾小時,目的是什么?
答:血清一定要滅活,可以先用無血清培養(yǎng)基加病毒孵育幾小時以后再加血清。避免雜蛋白對病毒和宿主 結(jié)合過程的干擾,一般是2-6小時,根據(jù)細胞的狀態(tài)決定。血清不一定需要滅活,滅活的目的是將血清中的補體滅活 !這要根據(jù)實際情況而定,如果沒有把握那就滅活吧,也不麻煩56度半個小時。
5、問:(1)我買的是Gibco北美胎牛血清,要滅活嗎?有些說法是需要,有些說直接解凍后就可以加入到培 養(yǎng)基中;我配制胰蛋白酶液,用的是D-PBS,有關(guān)系嗎?
答:關(guān)于血清的熱滅活,是很多人感興趣也存在一定爭議的話題。大多數(shù)實驗室將血清的熱滅活還是作為 常規(guī)來執(zhí)行,因為有兩個作用,是滅活補體,第二是滅活血清中可能存在的支原體。但是實驗者并沒有考慮熱處 理對血清中的生長因子、氨基酸等成分帶來的負面影響。
我在實驗室處理血清的時候,有一次水浴箱在滅活過程中出現(xiàn)故障,溫度升高到80℃,血清變成了凝膠狀 ,我重新處理了另外一份血清,將兩份血清對比,發(fā)現(xiàn)高溫直接影響到血清所含的抗體蛋白。在56℃下滅活半小時以 上,肯定也會對里面的蛋白起到破壞作用。下次有機會我做個延長滅活時間的實驗試試,看看到底有多大的影響。熱 滅活之后,血清放在四度冰箱久了,就會有沉淀產(chǎn)生,這常常會被認為是微生物污染或者是黑膠蟲污染。為了驗證到 底有沒有污染,常常又會把血清放置37℃溫育,但是血清中的蛋白會進一步析出,后還是要做鏡檢,無菌培養(yǎng)試驗 ,和革蘭氏染色試驗,非常麻煩。
我看過一份資料,里面提到70%的實驗者認為滅活是理所當然的。常規(guī)滅活建議的溫度在45℃到62℃之間, 而時間則從15分鐘到60分鐘不等。其中常用的手法是56℃熱處理30分鐘。隨著血清采集、處理、加工工藝的提高 ,許多早先認為是熱滅活的原因已經(jīng)不再成立,只有少數(shù)對血清進行熱滅活的研究者在實驗中證實了這一步驟的有效 性和必要性。有人比較過11個不同細胞株,發(fā)現(xiàn)其中熱滅活對6 個細胞株(HBAE,MDBK,Vero,成纖維細胞,MRC-5) 的生長帶來負面影響,三個細胞株(FOX-NY,MDCK和CHO-K1)不受熱滅活的影響,而只有兩個細胞株(Balb/3T3, Sp2/0Ag14 hybrid),在熱滅活之后,細胞生長有輕微的改善。所以,在正常的操作下,熱滅活通常對細胞的生長沒 有明顯的促進作用。
你可以摸索一下,血清從-20℃冰箱拿出來之后在常溫解凍,然后混勻分裝成兩份,一份滅活,一份不滅活 ,比較這兩種血清對細胞是否有影響。然后再確定是滅活還是不滅活。這個過程多也就一個星期。同時你還要考慮 血清滅活與否對你后續(xù)的實驗有沒有影響。
問:(2)分裝后的血清從-20℃取出放4℃讓其液化,卻見血清比較混濁,有沉淀產(chǎn)生,這屬正常嗎?
答:正常。