Noverse優(yōu)等胎牛血清
適合用于常規(guī)細胞原代細胞的培養(yǎng)
內(nèi)毒素含量極低 <3EU/ml(規(guī)定:特級胎牛血清<10 EU/ml)
極利于細胞的生長和傳代 ,適合各種細胞培養(yǎng)
七次無菌過濾,zui后三次為0.1 µm無菌過濾處理
進行細菌、真菌、支原體、病毒及病毒抗體檢測,符合動物協(xié)會要求
Noverse優(yōu)等胎牛血清
如何儲存和解凍血清才不會使產(chǎn)品質(zhì)量受損?
將血清從冷凍箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室溫下使之全融。但必須注意的是,融解過程中必須規(guī)則地搖晃均勻。
長時間儲存在2-8℃時,血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。因此,推薦在-20℃以下儲存血清,并避免反復(fù)凍融。
我們建議血清應(yīng)保存在-2O℃。若存放于4℃時,請勿超過一個月。若一次無法用完一瓶,建議無菌分裝血清至恰當?shù)臏缇萜鲀?nèi),再放回冷凍。
2、血清中包含絮狀沉淀,它們是什么,怎么處理?
沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白。這是正常特性,不會影響產(chǎn)品性質(zhì)。要除去沉淀,離心血清(400g,1-2分鐘)或者簡單的讓其沉淀在瓶子底部,將血清小心的轉(zhuǎn)移到另一個無菌瓶里(一般不建議采用過濾的方法除去沉淀,因為沉淀會堵塞濾膜而無法過濾)。大多情況輕輕搖動沉淀并加熱至37℃就會再溶解。所以,使用產(chǎn)品時要搖動并加熱血清至37℃,沉淀會自然消失。
如何避免血清中產(chǎn)生沉淀?
按如下操作可避免沉淀的產(chǎn)生:
(1)解凍血清時,請隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生。
(2) 血清分裝凍存時,須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一。
(3) 勿直接由-20℃直接至37℃解凍,因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。
(4) 勿將血清置于37℃太久,否則血清會變得渾濁,同時血清中許多較不穩(wěn)定的成份也會因此受到破壞,從而影響血清的品質(zhì)。
(5) 血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。
(6) 若必須做血清的熱滅活,請遵守56℃,30分鐘的原則,并且隨時搖晃均勻。溫度過高,時間過久或搖晃不均勻,都會造成沉淀物的增多。
培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素后,可長期保存嗎?
一旦您在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時,您應(yīng)該在兩到三周內(nèi)使用它。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍后就開始降解。
為什么要熱滅活血清?
加熱可以滅活補體系統(tǒng)。激活的補體參與溶解細胞事件,刺激平滑肌收縮,細胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學 研究,培養(yǎng)ES細胞、平滑肌細胞時,推薦使用熱滅活血清。
有必要做熱滅活嗎?
實驗顯示,經(jīng)過正確處理的熱滅活血清,對大多數(shù)的細胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進,或*沒有任何作用,甚至通常因為高溫處理影響了血清的質(zhì)量,而造成細胞生長速率的降低。而經(jīng)過熱處理的血清,沉淀物的形成會顯著的增多,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,像是“小黑點”,常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染,而把血清放在37℃環(huán)境中,又會使此沉淀物更增多,使研究者誤認為是微生物 的分裂擴增。
若非必須,可以不需要做熱處理這一步。不但節(jié)省時間,更確保血清的質(zhì)量!
細胞培養(yǎng) 中出現(xiàn)黑點是污染嗎?如何處理?
一旦您在細胞培養(yǎng)的過程中發(fā)現(xiàn)有黑點生成,首先,要肉眼觀察培養(yǎng)基是否混濁,然后,在鏡下觀察培養(yǎng)細胞生長的狀態(tài),黑點是否游動。如果細胞被污染,微生物則會大量繁殖,培養(yǎng)基就會迅速變黃、變混濁。污染包括細菌污染、支原體污染等。
如果在鏡下觀察細胞,生長狀態(tài)良好,與黑點出現(xiàn)前相比,沒有任何變化,那么,黑點的出現(xiàn)可能與以下幾種情況有關(guān):
(1)細胞生長過老,破碎的細胞殘骸;
(2)血清質(zhì)量不好,反復(fù)凍融的結(jié)果;
(3)配制培養(yǎng)基的pH值偏高,不宜細胞生長;
(4)配制培養(yǎng)基的水質(zhì)、容器不合格??蓱?yīng)用離心、過濾的方法去除這些黑點;
(5)培養(yǎng)原代細胞中出現(xiàn)小黑點,可能是原代組織中的雜質(zhì),多次傳代可以消除。
細胞培養(yǎng)中如何防止黑點生成?
(1) 盡可能地減少血清凍融次數(shù)。
(2) 培養(yǎng)基無需37℃水浴。
(3) 培養(yǎng)基保持PH值7.0- 7.2。
(4) 嚴格控制配制培養(yǎng)基的水質(zhì),容器定期刷洗。
(5) 掌握細胞傳代的時機,細胞切勿生長過老。
小牛血清和胎牛血清有何區(qū)別與注意事項?
來源不同:胎牛血清(Fetal Bovine Serum ,FBS) 是在屠宰懷孕母牛的時候,通過心臟穿刺采血獲取的胎牛的血清,新生牛(小牛)血清(Calf serum, CS)采自出生10至14 天的小牛。
組份與比例不同:兩者所含的促細胞生長因子、促貼附因子、激素及其他活性物質(zhì)等組份與比例不同,用途與用法不同:某些細胞必需胎牛血清才能生長,而有些細胞只需小牛血清即可,使用濃度不同,一般在5%-10%,有特殊要求的濃度在20%。
血清保存和使用須注意:血清應(yīng)保存在-5℃至-20℃,若存放在4℃不可超過一個月。解凍血清時 ,應(yīng)先將血清至于2-8℃冰箱,并經(jīng)常搖勻使之溶解,然后至室溫放置使之升溫。不可將冷凍的血清直接放入37℃水浴或者溫箱中,如放在37℃解凍,顏色加深,粘稠度也會增加,血清在解凍和熱滅活后,應(yīng)按用量分裝并于-20℃保存,避免反復(fù)凍融。
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適合用于常規(guī)細胞原代細胞的培養(yǎng)
內(nèi)毒素含量極低 <3EU/ml(規(guī)定:特級胎牛血清<10 EU/ml)
極利于細胞的生長和傳代 ,適合各種細胞培養(yǎng)
七次無菌過濾,zui后三次為0.1 µm無菌過濾處理
進行細菌、真菌、支原體、病毒及病毒抗體檢測,符合動物協(xié)會要求
血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物,其組成成份雖大部分已知,但還有一部分尚不清楚,且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、無機物等,這些物質(zhì)對促進細胞生長或抑制生長活性是達到生理平衡的
牛血清是細胞培養(yǎng)中用量zui大的天然培養(yǎng)基,含有豐富的細胞生長必須的營養(yǎng)成份,常用于動物細胞的體外培養(yǎng),具有極為重要的功能。
1.提供對維持細胞指數(shù)生長的激素,基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物,以及主要的低分子營養(yǎng)物。
2. 提供結(jié)合蛋白,能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等,能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。
3.有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合,起到解毒作用。
4.是細胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來源。
5.起酸堿度緩沖液作用。
6.提供蛋白酶抑制劑,使在細胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活,保護細胞不受傷害。