Hyclone胎牛血清現(xiàn)貨
HyClone以客戶需求作為產(chǎn)品開發(fā)和制造工藝的激勵(lì)因素,在這方面保持著引以為豪的記錄。比如,HyClone是*家在胎牛血清生產(chǎn)中引入*真正混合技術(shù)的公司,大限度地降低了血清批次間乃至同批次每瓶之間的差異。隨后這種技術(shù)成為了無動(dòng)物源性產(chǎn)品的監(jiān)管標(biāo)準(zhǔn)。HyClone勤勉盡職地和客戶合作,致力于創(chuàng)造滿足客戶需求的高性能產(chǎn)品
HyClone-SH30370.03北美特級胎牛血清現(xiàn)貨 血清中的沉淀物和絮狀物:主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成,這些絮狀物不會(huì)影響血清本身的質(zhì)量.可用離心3000rpm,5分鐘去除,也可不用處理。 顯微鏡下"小黑點(diǎn)":經(jīng)過熱處理過的血清,沉淀物的形成會(huì)顯著增多。有些沉淀物在顯微鏡下觀察象"小黑點(diǎn)",常誤認(rèn)為血清受污染。一般情況下,此小黑點(diǎn)不會(huì)影響細(xì)胞生長,但如果懷疑血清質(zhì)量,則應(yīng)立即停止使用,更換另一批號的血清。 胎牛血清FBS保存方法1、需要長期保存的PAN牛血清必須儲(chǔ)存于-20℃ - 70℃ 低溫冰箱中。4℃冰箱中保存時(shí)間切勿超過1個(gè)月。切勿將血清在 37℃放置太久,否則血清會(huì)變得渾濁,同時(shí)血 清中的有效成分會(huì)被破壞,而影響血清質(zhì)量。如果一次無法用完一瓶,可 將40~45ml分裝于無菌50ml離心管中。由于血清結(jié)冰時(shí)體積會(huì)增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前,必須預(yù)留 一 定體積空間,否則易發(fā)生污染或玻璃瓶凍裂。2、一般廠商提供的血清為無菌,無需再過濾除菌。如發(fā)現(xiàn)血清有懸浮物,則可將血清加入培養(yǎng)液內(nèi)一起過濾,切勿直接 過濾血清。 3、瓶裝血清解凍需采用逐步解凍法:-20℃ 至 -70℃ 低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室溫,待全 部溶解后再分裝,一般以50ml無菌離心管可分裝40~45ml。在溶解過程 中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度 與成分均一,減少沈淀的發(fā)生。.切勿直接將血清從-20℃進(jìn)入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝集而 出現(xiàn)沉淀。 4、熱滅活是指56℃, 30分鐘加熱已*解凍的血清.加熱過程中須規(guī)則搖晃均勻.此熱處理的目的是使血清中的補(bǔ)體 成分滅活.除非必須,一般不建議作此熱處理,因?yàn)闊崽幚頃?huì)造成血清沉 淀物顯著增多,而且還會(huì)影響血清的質(zhì)量.補(bǔ)體 參與反應(yīng)有:細(xì)胞毒作用, 平滑肌細(xì)胞收縮, 肥大細(xì)胞和血小板釋放組胺, 增強(qiáng)吞噬作用, 促進(jìn)淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞 發(fā)生化學(xué)趨化和活化。 5、血清中的沉淀物 絮狀物:主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成,這些絮狀物不會(huì)影響血清本身 的質(zhì)量.可用離心3000rpm,5分鐘去除,也可不用處理。 顯微鏡下 "小黑點(diǎn)":經(jīng)過熱處理過的血清,沉淀物 的形成會(huì)顯著增多。有些沉淀物在顯微鏡下觀察象"小黑點(diǎn)",常誤認(rèn)為血清受污染。一般情況下,此小黑 點(diǎn)不會(huì)影響細(xì)胞生 長,但如果懷疑血清質(zhì)量,則應(yīng)立即停止使用,更換另一批號的血清。 PAN胎牛血清使用中遇到的常見問題總結(jié)一、血清滅活問題。
1、問:加到培養(yǎng)基中的血清必須滅活嗎?
答:不是必須的,看做什么實(shí)驗(yàn)了。
2、問:PAN胎牛血清滅活是56℃ 30分鐘嗎?
答:如果用于培養(yǎng)大多數(shù)的腫瘤細(xì)胞,血清一般是不需要滅活的,這樣可以有效保存血清中的生長因子。 但是如果用于培養(yǎng)一些表面具有補(bǔ)體受體的細(xì)胞,如內(nèi)皮細(xì)胞,血清是 需要滅活,一般是56℃,30min。
3、問:我要做滋養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng),胎牛血清要滅活嗎?
答:進(jìn)口的一般都已滅活,國產(chǎn)的不一定,還是滅活一下再用較安全。
4、問:我用病毒上清轉(zhuǎn)染細(xì)胞,培養(yǎng)用的血清需要滅活嗎?因?yàn)檠逯锌赡苡行┭a(bǔ)體和抗體,是不是會(huì)影 響轉(zhuǎn)染?我想未滅活的血清中含些抗體補(bǔ)體可能會(huì)和病毒相結(jié)合,影響 轉(zhuǎn)染,正確嗎?細(xì)胞是單核細(xì)胞白血病細(xì)胞, 病毒是病毒包裝細(xì)胞PT67收集的病毒上清。為什么要用無血清培養(yǎng)基加病毒孵育幾小時(shí),目的是什么?
答:血清一定要滅活,可以先用無血清培養(yǎng)基加病毒孵育幾小時(shí)以后再加血清。避免雜蛋白對病毒和宿主 結(jié)合過程的干擾,一般是2-6小時(shí),根據(jù)細(xì)胞的狀態(tài)決定。血清不一定需 要滅活,滅活的目的是將血清中的補(bǔ)體滅活 !這要根據(jù)實(shí)際情況而定,如果沒有把握那就滅活吧,也不麻煩56度半個(gè)小時(shí)。
5、問:(1)我買的是PAN南美胎牛血清,要滅活嗎?有些說法是需要,有些說直接解凍后就可以加入到培 養(yǎng)基中;我配制胰蛋白酶液,用的是D-PBS,有關(guān)系嗎?
答:關(guān)于血清的熱滅活,是很多人感興趣也存在一定爭議的話題。大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室將血清的熱滅活還是作為 常規(guī)來執(zhí)行,因?yàn)橛袃蓚€(gè)作用,*是滅活補(bǔ)體,第二是滅活血清中可 能存在的支原體。但是實(shí)驗(yàn)者并沒有考慮熱處 理對血清中的生長因子、氨基酸等成分帶來的負(fù)面影響。
我在實(shí)驗(yàn)室處理血清的時(shí)候,有一次水浴箱在滅活過程中出現(xiàn)故障,溫度升高到80℃,血清變成了凝膠狀 ,我重新處理了另外一份血清,將兩份血清對比,發(fā)現(xiàn)高溫直接影響到 血清所含的抗體蛋白。在56℃下滅活半小時(shí)以 上,肯定也會(huì)對里面的蛋白起到破壞作用。下次有機(jī)會(huì)我做個(gè)延長滅活時(shí)間的實(shí)驗(yàn)試試,看看到底有多大的影響。熱 滅活之后,血清放在四 度冰箱久了,就會(huì)有沉淀產(chǎn)生,這常常會(huì)被認(rèn)為是微生物污染或者是黑膠蟲污染。為了驗(yàn)證到 底有沒有污染,常常又會(huì)把血清放置37℃溫育,但是血清中的蛋白會(huì)進(jìn)一步析出,后還是 要做鏡檢,無菌培養(yǎng)試驗(yàn) ,和革蘭氏染色試驗(yàn),非常麻煩。
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