A3細(xì)胞,人T淋巴白血病細(xì)胞
產(chǎn)品名稱:A3
細(xì)胞形態(tài):淋巴母細(xì)胞樣
組織來源:淋巴
傳代情況:P3-P5
細(xì)胞數(shù)量:1~3*106細(xì)胞/25cm2培養(yǎng)瓶
特征特性:A3亞克隆來自Jurkat細(xì)胞系。 用Fas抗體處理Jurkat細(xì)胞,用有限稀釋法獲得一個(gè)細(xì)胞系,此細(xì)胞系對Fas介導(dǎo)的凋亡產(chǎn)生自發(fā)抗性的比例較低。得到的亞克隆對Fas-介導(dǎo)的凋亡十分敏感。 挑選對新霉素具有抗性的野生型A3細(xì)胞,并三次用移碼突變誘變劑ICR-191進(jìn)行處理以分離具有抗Fas抗體殺傷的隱性突變體。
培養(yǎng)條件:RPMI 1640 (w/o Hepes)
傳代方法:1:2~1:4傳,2-3天1次
生長條件:95%空氣+5%二氧化碳 37攝氏度
生長狀態(tài):懸浮生長
存儲條件:90%FBS+10%DMSO
A3細(xì)胞,人T淋巴白血病細(xì)胞
對于貼壁細(xì)胞,若細(xì)胞漂浮:培養(yǎng)瓶不開封,用75%酒精擦拭后平躺置于培養(yǎng)箱內(nèi)。次日觀察,如細(xì)胞大部分又貼回瓶底,表明細(xì)胞活力正常,剩余漂浮的細(xì)胞可以去掉,換成新鮮的培養(yǎng)基;如細(xì)胞還不貼壁,將細(xì)胞離心收集移到新的培養(yǎng)瓶中,原培養(yǎng)瓶加部分新鮮培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng),中間注意觀察,我們的技術(shù)人員會一直跟蹤指導(dǎo),直到問題解決。對于懸浮細(xì)胞:收到細(xì)胞后,將細(xì)胞全部離心,去掉舊的培養(yǎng)基,換成新鮮的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
特別注意:(如使用公共實(shí)驗(yàn)室或者初次接觸,建議添加雙抗培養(yǎng))
(1)貼壁細(xì)胞收到當(dāng)天有少量或沒有飄忽的細(xì)胞可以當(dāng)天換液,因?yàn)槁吠绢嶔ぴ斐纱罅匡h忽的情況時(shí),請將細(xì)胞換液后放置培養(yǎng)箱孵育到第二天再做消化傳代,請優(yōu)先選擇直徑6cm的培養(yǎng)皿進(jìn)行傳代培養(yǎng)
(2)收到細(xì)胞后請盡快更換為含10%血清的新鮮培養(yǎng)基,如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶,請?jiān)谠颗囵B(yǎng)基中額外添加10%的血清,(原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時(shí)間最長不宜超過72小時(shí))
(3)如簽收時(shí)出現(xiàn)培養(yǎng)瓶壁破裂,漏液等情況請及時(shí)做好照片記錄并聯(lián)系SUER技術(shù)人員
細(xì)胞接收后的操作流程與注意事項(xiàng):
1)貼壁細(xì)胞生長緩慢;適當(dāng)提高血清濃度(最高不能超過20%),或可根據(jù)該細(xì)胞生長特性生長密度,考慮胰酶消化后,轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶繼續(xù)培養(yǎng)
2)如果細(xì)胞為貼壁細(xì)胞,而收到時(shí)呈懸浮或者部分懸浮的狀態(tài),請將懸浮的細(xì)胞即時(shí)離心,加15%血清的*培養(yǎng)基到新的培養(yǎng)皿/瓶繼續(xù)培養(yǎng)3天;同時(shí)原培養(yǎng)瓶中剩下的貼壁細(xì)胞更換為15%血清的*培養(yǎng)基培養(yǎng)3天。3天后若原瓶或者新瓶中的細(xì)胞都沒有出現(xiàn)增值而是繼續(xù)脫落死亡,請及時(shí)聯(lián)系實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員會跟進(jìn)解決
3)生長不均:貼壁細(xì)胞若出現(xiàn)分布不均,成島狀生長,可將細(xì)胞進(jìn)行消化,重懸打散細(xì)胞,加入新鮮培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)
細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程(請嚴(yán)格遵照無菌操作)
(1)吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,PBS緩沖液潤洗細(xì)胞兩次,加2-3ml 0.25%胰酶進(jìn)行消化細(xì)胞(注意把握消化時(shí)間,通常控制在1-2min)
(2)注意培養(yǎng)基PH值變化情況,定期換液(每周2-3次),待細(xì)胞密度達(dá)到80%以后重復(fù)1項(xiàng)操作或者凍存
(3)取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中,添加適當(dāng)?shù)?培養(yǎng)基,把細(xì)胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)
(4)鏡下觀察消化情況,在HS505.T人淋巴結(jié)成纖維樣細(xì)胞生長特性邊緣縮小,貼壁松動時(shí)(不建議消化到細(xì)胞漂?。┤サ粢让福?-8ml*培養(yǎng)基,輕輕吹打細(xì)胞層,盡量把細(xì)胞層吹落,吹散。