BGC-823人胃腺癌細胞(低分化)
當(dāng)密度達到傳代密度且細胞活性在90%以上時,可以凍存細胞,在超凈臺中將要凍存的細胞移入離心管,1000rpm離心5min,棄上清,用90%培養(yǎng)液+10%DMSO的混合液重懸細胞,并調(diào)整細胞密度為4-6×106/ml,將細胞懸液分裝到凍存管中(1-1.5ml/管)。
含量:>1x106 個/mL, 規(guī)格:T75瓶或者1mL凍存管包裝
培養(yǎng)基:RPMI-1640(GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, glucose 2.5g/L, Sodium Pyruvate 0.11g/L),90%;胎牛血清,10%。 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度。
生長特性:貼壁生長
污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
運輸和保存:可選擇干冰運輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細胞方式:(1)干冰運輸,收到后立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇;(2)存活細胞,收到后應(yīng)繼續(xù)生長,傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時,再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。
BGC-823人胃腺癌細胞(低分化)
傳代操作步驟:
一、貼壁細胞傳代
1.提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱,用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi)。
2.吸除或倒掉細胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液,加少量PBS潤洗細胞。
3.加入適量胰酶,使胰酶的量能蓋住細胞,37℃孵育,每隔2~3min顯微鏡下觀察,待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶,加入新鮮培養(yǎng)基,晃動細胞瓶,終止胰酶作用。
4.用吸管小心吹打貼壁的細胞,制成細胞懸液??刂拼荡虻牧Χ龋苊猱a(chǎn)生大量的氣泡。
5.將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng),隔天觀察貼壁生長情況。
二、懸浮細胞傳代
1.將細胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi),1000rpm離心5min。
2.棄去上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,用吸管小心吹散沉淀,制成細胞懸液。
3.將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng)。
培養(yǎng)的過程中,經(jīng)常見到黑色的顆粒或小黑點,這種情況是怎么引起的呢?該怎么避免呢?原因:
黑點,大概有細胞本身帶的,環(huán)境有的,還有人身上帶進細胞間的,還有就是血清和培養(yǎng)基
1、如果小黑點有增殖趨勢,那么就有可能是污染了,需要處理;
2、如果小黑點沒有增殖趨勢,且不影響細胞生長,也不影響實驗的話,則可能
a、是“黑膠蟲”,黑膠蟲究竟是一種生物還是非生物,本身就存在爭議。有人認為是從血清中來的一種原蟲,也有人認為是細菌,或是真菌,也有人認為是血清中的蛋白的結(jié)晶。“黑膠蟲”可寄生于動物細胞,也可以生存于培養(yǎng)基中,依靠和培養(yǎng)基中的營養(yǎng)為生,并隨細胞傳代而傳代。“黑膠蟲”與細胞競爭性生長,開始時對細胞并沒有什么影響,但當(dāng)黑膠蟲的數(shù)量多到一定程度的時候, 細胞生長就會受到影響直至死亡,嚴(yán)重影響了科研活動的開展和進行。以前(這個至少是10年以前),很多實驗室在養(yǎng)細胞時用國產(chǎn)血清,那時的血清可能質(zhì)量不過關(guān),有所謂的“黑膠蟲”,但是也沒有明確的鑒定。但是現(xiàn)在的血清,即使國產(chǎn)的,產(chǎn)品里這種現(xiàn)象就少見了。
b、是細胞碎片,或血清里德沉淀析出,在做布朗運動。
c、是核糖體,也可能是雜質(zhì)ZYC3194 人宮頸癌腸轉(zhuǎn)移細胞 Ca Ski 形態(tài):貼壁,懸浮均有;上皮細胞樣 培養(yǎng)條件:MEM/F12 +10% FBS
ZYC3195 人子宮鱗癌細胞(高分化) HCC 94 [HCC941122] 形態(tài):貼壁,懸浮均有;上皮細胞樣 培養(yǎng)條件:MEM/F12 +10% FBS
ZYC3196 人子宮內(nèi)膜腺癌細胞 HEC-1-B 形態(tài):貼壁,懸浮均有;上皮細胞樣 培養(yǎng)條件:MEM/F12 +10% FBS
ZYC3197 人卵巢癌細胞 SK-OV-3 形態(tài):貼壁,懸浮均有;上皮細胞樣 培養(yǎng)條件:MEM/F12 +10% FBS
ZYC3198 人卵巢透明細胞癌 ES-2 形態(tài):貼壁,懸浮均有;上皮細胞樣 培養(yǎng)條件:MEM/F12 +10% FBS
ZYC3199 人乳腺癌細胞 HCC1937 形態(tài):貼壁,懸浮均有;上皮細胞樣 培養(yǎng)條件:MEM/F12 +10% FBS
ZYC3200 人胎盤絨毛癌細胞 JAR 形態(tài):貼壁,懸浮均有;上皮細胞樣 培養(yǎng)條件:MEM/F12 +10% FBS
ZYC3201 人羊膜細胞 WISH 形態(tài):貼壁,懸浮均有;上皮細胞樣 培養(yǎng)條件:MEM/F12 +10% FBS
ZYC3202 人整合SV40基因的乳腺上皮細胞 HBL-100 形態(tài):貼壁,懸浮均有;上皮細胞樣 培養(yǎng)條件:MEM/F12 +10% FBS
ZYC3203 人乳腺癌細胞 Hs 578T 形態(tài):貼壁,懸浮均有;上皮細胞樣 培養(yǎng)條件:MEM/F12 +10% FBS
ZYC3204 人乳腺癌細胞 MCF7 [MCF-7] 形態(tài):貼壁,懸浮均有;上皮細胞樣 培養(yǎng)條件:MEM/F12 +10% FBS