CCC-ESF-1人皮膚成纖維細(xì)胞
當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到傳代密度且細(xì)胞活性在90%以上時,可以凍存細(xì)胞,在超凈臺中將要凍存的細(xì)胞移入離心管,1000rpm離心5min,棄上清,用90%培養(yǎng)液+10%DMSO的混合液重懸細(xì)胞,并調(diào)整細(xì)胞密度為4-6×106/ml,將細(xì)胞懸液分裝到凍存管中(1-1.5ml/管)。
含量:>1x106 個/mL, 規(guī)格:T75瓶或者1mL凍存管包裝
培養(yǎng)基:DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS
生長特性:貼壁生長
污染:支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測為陰性
運(yùn)輸和保存:可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式:(1)干冰運(yùn)輸,收到后立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇;(2)存活細(xì)胞,收到后應(yīng)繼續(xù)生長,傳代達(dá)到細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,再進(jìn)行凍存。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。
CCC-ESF-1人皮膚成纖維細(xì)胞
傳代操作步驟:
一、貼壁細(xì)胞傳代
1.提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱,用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi)。
2.吸除或倒掉細(xì)胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液,加少量PBS潤洗細(xì)胞。
3.加入適量胰酶,使胰酶的量能蓋住細(xì)胞,37℃孵育,每隔2~3min顯微鏡下觀察,待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶,加入新鮮培養(yǎng)基,晃動細(xì)胞瓶,終止胰酶作用。
4.細(xì)胞用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞,制成細(xì)胞懸液。控制吹打的力度,避免產(chǎn)生大量的氣泡。
5.將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個細(xì)胞瓶內(nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng),隔天觀察貼壁生長情況。
二、懸浮細(xì)胞傳代
1.將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi),1000rpm離心5min。
2.棄去上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,用吸管小心吹散沉淀,制成細(xì)胞懸液。
3.將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個細(xì)胞瓶內(nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng)。
培養(yǎng)的過程中,經(jīng)常見到黑色的顆?;蛐『邳c(diǎn),這種情況是怎么引起的呢?該怎么避免呢?原因:
黑點(diǎn),大概有細(xì)胞本身帶的,環(huán)境有的,還有人身上帶進(jìn)細(xì)胞間的,還有就是血清和培養(yǎng)基
1、如果小黑點(diǎn)有增殖趨勢,那么就有可能是污染了,需要處理;
2、如果小黑點(diǎn)沒有增殖趨勢,且不影響細(xì)胞生長,也不影響實驗的話,則可能
a、是“黑膠蟲”,黑膠蟲究竟是一種生物還是非生物,本身就存在爭議。有人認(rèn)為是從血清中來的一種原蟲,也有人認(rèn)為是細(xì)菌,或是真菌,也有人認(rèn)為是血清中的蛋白的結(jié)晶。“黑膠蟲”可寄生于動物細(xì)胞,也可以生存于培養(yǎng)基中,依靠細(xì)胞和培養(yǎng)基中的營養(yǎng)為生,并隨細(xì)胞傳代而傳代。“黑膠蟲”與細(xì)胞競爭性生長,開始時對細(xì)胞并沒有什么影響,但當(dāng)黑膠蟲的數(shù)量多到一定程度的時候, 細(xì)胞生長就會受到影響直至死亡,嚴(yán)重影響了科研活動的開展和進(jìn)行。以前(這個至少是10年以前),很多實驗室在養(yǎng)細(xì)胞時用國產(chǎn)血清,那時的血清可能質(zhì)量不過關(guān),有所謂的“黑膠蟲”,但是也沒有明確的鑒定。但是現(xiàn)在的血清,即使國產(chǎn)的,產(chǎn)品里這種現(xiàn)象就少見了。
b、是細(xì)胞碎片,或血清里德沉淀析出,在做布朗運(yùn)動。
c、是核糖體,也可能是雜質(zhì)ZYC3664 小鼠黑質(zhì)神經(jīng)元 MN-sn 形態(tài):貼壁,懸浮均有;上皮細(xì)胞樣 培養(yǎng)條件:MEM/F12 +10% FBS
ZYC3665 小鼠紋狀體神經(jīng)元 MN-s 形態(tài):貼壁,懸浮均有;上皮細(xì)胞樣 培養(yǎng)條件:MEM/F12 +10% FBS
ZYC3666 小鼠腹脊髓神經(jīng)元 MN-vsc 形態(tài):貼壁,懸浮均有;上皮細(xì)胞樣 培養(yǎng)條件:MEM/F12 +10% FBS
ZYC3667 小鼠背脊髓神經(jīng)元 MN-dsc 形態(tài):貼壁,懸浮均有;上皮細(xì)胞樣 培養(yǎng)條件:MEM/F12 +10% FBS
ZYC3668 小鼠脊髓神經(jīng)元 MN-sc 形態(tài):貼壁,懸浮均有;上皮細(xì)胞樣 培養(yǎng)條件:MEM/F12 +10% FBS
ZYC3669 小鼠少突膠質(zhì)前體細(xì)胞 MOPC 形態(tài):貼壁,懸浮均有;上皮細(xì)胞樣 培養(yǎng)條件:MEM/F12 +10% FBS
ZYC3670 小鼠雪旺細(xì)胞 MSC 形態(tài):貼壁,懸浮均有;上皮細(xì)胞樣 培養(yǎng)條件:MEM/F12 +10% FBS
ZYC3671 小鼠神經(jīng)束膜細(xì)胞 MPNF 形態(tài):貼壁,懸浮均有;上皮細(xì)胞樣 培養(yǎng)條件:MEM/F12 +10% FBS
ZYC3672 小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞 MA 形態(tài):貼壁,懸浮均有;上皮細(xì)胞樣 培養(yǎng)條件:MEM/F12 +10% FBS
ZYC3673 小鼠小腦星形膠質(zhì)細(xì)胞 MA-c 形態(tài):貼壁,懸浮均有;上皮細(xì)胞樣 培養(yǎng)條件:MEM/F12 +10% FBS
ZYC3674 小鼠海馬趾星形膠質(zhì)細(xì)胞 MA-h 形態(tài):貼壁,懸浮均有;上皮細(xì)胞樣 培養(yǎng)條件:MEM/F12 +10% FBS
ZYC3675 小鼠脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞 MA-sc 形態(tài):貼壁,懸浮均有;上皮細(xì)胞樣 培養(yǎng)條件:MEM/F12 +10% FBS