EA.hy926人視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞

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人視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基多次重復(fù)實(shí)驗(yàn)證明人視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞在相應(yīng)*培養(yǎng)基中能持續(xù)多次傳代仍能保持原代細(xì)胞的分化狀態(tài)。
    人視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基中已包含了高質(zhì)量的血清和人視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞所需生長(zhǎng)因子，可直接用于人視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞的培養(yǎng)。
單純細(xì)胞培養(yǎng)的話，主要是這些耗材：

1. 人視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基一般試劑和耗材：

（1）*培養(yǎng)基：一般是用不*培養(yǎng)基+10%FBS（胎牛血清）自己配的，有時(shí)也添加雙抗預(yù)防細(xì)胞感染。具體培養(yǎng)基類型根據(jù)你養(yǎng)的細(xì)胞類型去選擇。

（2）胰蛋白酶：簡(jiǎn)稱是胰酶，消化細(xì)胞用的。

（3）培養(yǎng)皿：10cm、6cm等，具體根據(jù)情況進(jìn)行選擇；有些特殊的細(xì)胞類型還會(huì)用到培養(yǎng)瓶。

（4）吸管、槍頭、顯微鏡、50ml管等。

2. 人視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基細(xì)胞凍存試劑和耗材：

（1）凍存液：一般用10%DMSO+FBS+培養(yǎng)基組成，FBS和培養(yǎng)基的比例依細(xì)胞類型決定，比較珍貴的細(xì)胞一般用90%FBS，一般的細(xì)胞可以用50%FBS+40%培養(yǎng)基來配制。

（2）胰蛋白酶等用于細(xì)胞培養(yǎng)的一般試劑。

（3）凍存管、離心管、離心機(jī)、吸管、槍頭、顯微鏡、凍存盒、冰箱、液氮罐等。

3. 人視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基細(xì)胞復(fù)蘇試劑和耗材：

（1）一般試劑和耗材。

（2）水浴箱等。

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常見問題及解決方案:

1、培養(yǎng)瓶有破裂，培養(yǎng)液有漏液：細(xì)胞極大可能會(huì)污染，所以我們會(huì)及時(shí)安排幫老師解決。

2、 細(xì)胞漂?。号囵B(yǎng)瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。次日觀察，如細(xì)胞大部分又貼回瓶底，表明細(xì)胞活力正常，剩余漂浮的細(xì)胞可以離心去掉，留10ml培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察，細(xì)胞生長(zhǎng)至匯合度80%，進(jìn)行消化傳代；如細(xì)胞還是不貼壁，將細(xì)胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀察，我們的技術(shù)人員會(huì)一直跟蹤指導(dǎo)，直到問題解決。

3、對(duì)于生長(zhǎng)緩慢的貼壁細(xì)胞：可采用適當(dāng)?shù)奶岣吲囵B(yǎng)基中血清濃度，或隔日換液的方法來保證細(xì)胞的狀態(tài)和生長(zhǎng)速度。

4、對(duì)于生長(zhǎng)不均的貼壁細(xì)胞：在培養(yǎng)過程中若出現(xiàn)細(xì)胞分布明顯不均時(shí)（即某一區(qū)域細(xì)胞已重疊生長(zhǎng)，而旁邊則為一塊空白），此時(shí)可將細(xì)胞進(jìn)行消化，重新打散，貼壁，加入新培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。

復(fù)蘇細(xì)胞注意事項(xiàng)：

1收到細(xì)胞后當(dāng)天換液，全部更換成客戶自己的新鮮培養(yǎng)基，放進(jìn)培養(yǎng)箱，第二天再消化。

2邊觀察邊消化，根據(jù)細(xì)胞的形態(tài)，終止消化時(shí)間，采取以半分鐘間隔吹打細(xì)胞邊緣，如可吹打下來，即終止消化?？蛻裘鞅容^好的消化時(shí)間。

3隨細(xì)胞有一份細(xì)胞操作說明書，請(qǐng)客戶仔細(xì)查看。

4記得加1%雙抗，降低被污染的概率。另外盡早凍存留種，以備后用。

5售后時(shí)間為一周，僅限于細(xì)胞本身的質(zhì)量問題，而因乙方自己不當(dāng)操作（不規(guī)范操作，消化過度，不加雙抗導(dǎo)致的污染等）導(dǎo)致的細(xì)胞問題不在售后范疇。

收到細(xì)胞后，如細(xì)胞狀態(tài)不佳，或培養(yǎng)中遇到問題，煩請(qǐng)當(dāng)天盡快聯(lián)系，以便處理。當(dāng)天及時(shí)反饋細(xì)胞情況和細(xì)胞照片是售后跟蹤處理重要的參考依據(jù)，請(qǐng)您務(wù)必重視。

7剛收到細(xì)胞時(shí)，胎牛血清可以用15%培養(yǎng)兩三天，利于細(xì)胞盡快恢復(fù)狀態(tài)，細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定后，再調(diào)回10%即可。