EMT6小鼠乳腺癌細(xì)胞
(1)請客戶收到細(xì)胞株產(chǎn)品后,立即對外包裝,細(xì)胞凍存管,細(xì)胞培養(yǎng)瓶等拍照,如有疑問或問題,須在24小時內(nèi)通知上海信裕生物科技有限公司,提供照片和書面說明
(2.)請客戶在收到復(fù)蘇細(xì)胞后,迅速將原裝的細(xì)胞瓶放入細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置,3-4小時后,再使用傳代(注:請客戶觀看細(xì)胞狀態(tài)后。如若細(xì)胞已經(jīng)長滿且貼壁好,也可靜止4小時左右后就傳代
(3.)請使用新配制的培養(yǎng)體系
(4.)請客戶培養(yǎng)細(xì)胞前三天,須對細(xì)胞生長狀態(tài)進(jìn)行拍照和注明時間,若細(xì)胞生長存在質(zhì)量問題,須向上海本公司提供培養(yǎng)生長的照片和書面說明。
(5.)請客戶仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書,提前準(zhǔn)備好相應(yīng)的培養(yǎng)體系,避免造成細(xì)胞質(zhì)量問題
EMT6小鼠乳腺癌細(xì)胞
注:(1),觀察細(xì)胞在低倍鏡(4或5X物鏡)下進(jìn)行,否則不能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度??醇?xì)胞的形態(tài)請在10X或20X物鏡下。
(2),瓶中運(yùn)輸培養(yǎng)基不能重復(fù)再用,請換用加雙抗或無雙抗的新培養(yǎng)基,細(xì)胞凍存后,培養(yǎng)基中可不加任何抗生素。
(3),有些細(xì)胞貼壁不牢,如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞脫落,可離心吹打后接種到新瓶內(nèi)。
常見問題及解決方案
1、培養(yǎng)瓶有破裂,培養(yǎng)液有漏液:極大可能會污染,所以我們會及時安排幫老師解決。 2、細(xì)胞漂?。号囵B(yǎng)瓶不開封,瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。次日觀察,如細(xì)胞大部分又貼回瓶底,表明細(xì)胞活力正常,剩余漂浮的細(xì)胞可以去掉,留 10ml 培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察,細(xì)胞生長至匯合度 80%,進(jìn)行消化傳代;如細(xì)胞還是不貼壁,將細(xì)胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶,原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng),中間注意觀察,我們的技術(shù)人員會一直跟蹤指導(dǎo),直到問題解決。
選擇正確的培養(yǎng)基:不同的細(xì)胞可能培養(yǎng)基不同,甚至不同的文獻(xiàn)可能對相同的細(xì)胞培養(yǎng)基成分也是可能不同的。如我當(dāng)時培養(yǎng)神經(jīng)干細(xì)胞,有文獻(xiàn)就選用neurobase培養(yǎng)基,而我的實驗?zāi)康闹饕亲隹寡趸脱趸矫娴?,而這種培養(yǎng)基中含有抗氧化劑成分,此時,我就不得不選擇另外一種不含抗氧化劑的培養(yǎng)基。
瓶裝血清一定要逐步解凍: 4℃冰箱全溶后再分裝,在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻小心勿造成氣泡,使溫度與成分均一,減少沉淀的發(fā)生。勿直接由–20℃直接至37℃ 解凍,因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。
熱滅活是指56℃,30分鐘加熱已*解凍之血清。水浴鍋升到56℃后,將血清放入,待溫度升高到56℃后計時,一般5分鐘左右規(guī)則搖晃均勻一次。此熱處理之目的是使血清中之補(bǔ)體成份去活化。除非必須,一般不要作此熱處理,因為會造成沉淀物之顯著增多,且會影響血清之品質(zhì)。注意更換新血清包括不同批次對細(xì)胞的影響?!炯?xì)胞縮寫】" EMT-6細(xì)胞
【背景資料】 見細(xì)胞說明書
【細(xì)胞來源】 細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國內(nèi)外著名大學(xué)建系
【代次】 P4
【規(guī)格】 復(fù)蘇T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存1ml凍存管(兩支)
"細(xì)胞凍存及復(fù)蘇基本知識普及:
細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之一。利用凍存技術(shù)將細(xì)胞置于-196℃液氮中低溫保存,可以使細(xì)胞暫時脫離生長狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來,這樣在需要的時候再復(fù)蘇細(xì)胞用于實驗。而且適度地保存一定量的細(xì)胞,可以防止因正在培養(yǎng)的細(xì)胞被污染或其他意外事件而使細(xì)胞丟種,起到了細(xì)胞保種的作用。
除此之外,還可以利用細(xì)胞凍存的形式來購買、寄贈、交換和運(yùn)送某些細(xì)胞。細(xì)胞凍存時向培養(yǎng)基中加入保護(hù)劑--終濃度5%.15%的甘油或二甲基亞砜DMSO,可使溶液冰點降低,加之在緩慢凍結(jié)條件下,細(xì)胞內(nèi)水分透出,減少了冰晶形成,從而避免細(xì)胞損傷。
采用""慢凍快融""的方法能較好地保證細(xì)胞存活。標(biāo)準(zhǔn)冷凍速度開始為-1 到 -2℃/min,當(dāng)溫度低于-25℃時可加速,到-80℃之后可直接投入液氮內(nèi)-196℃?!炯?xì)胞數(shù)】" 1*10(6)
【生物安全級別】 1
【生物體】 小鼠
【組織來源】 乳腺
【細(xì)胞形態(tài)】 上皮細(xì)胞樣
【細(xì)胞特性】 貼壁
【細(xì)胞活力】 95%(Viability by Trypan Blue Exclusion)
【細(xì)胞檢測】 細(xì)胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌