FaDu人咽鱗癌細(xì)胞
細(xì)胞縮寫: FaDu細(xì)胞
細(xì)胞名稱: FaDu(人咽鱗癌細(xì)胞)
詳細(xì)背景: 1968年從一位印度下咽骨腫瘤患者的鉆孔活組織切片中建立了FaDu細(xì)胞株。在建立的細(xì)胞株中發(fā)現(xiàn)細(xì)胞質(zhì)中含有成束的細(xì)絲, 細(xì)胞分界上的橋粒特別突出。
細(xì)胞來源: 細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國內(nèi)外著名大學(xué)建系
"購買細(xì)胞注意事項:
1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。
2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書,了解細(xì)胞相關(guān)信息,如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等。
3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面,細(xì)胞顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運輸問題貼壁細(xì)胞會有少量從瓶壁脫落,將細(xì)胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)過夜,隔天再取出觀察。此時多數(shù)細(xì)胞均會貼壁,若細(xì)胞仍不能貼壁請用臺盼藍染色測定細(xì)胞活力,如果證實細(xì)胞活力正常,請將細(xì)胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng);如果染色結(jié)果顯示細(xì)胞無活力,請拍下照片及時和我們聯(lián)系,信息確認(rèn)后我們?yōu)槟倜赓M寄送一次。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片,記錄細(xì)胞狀態(tài),便于和技術(shù)部溝通交流。" P4
規(guī)格: 復(fù)蘇T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存1ml凍存管(兩支)
細(xì)胞規(guī)格: 1*10(5)/ml——1*10(6)/ml
安全水平: 1
細(xì)胞種屬: 人
組織來源: 咽鱗癌
細(xì)胞形態(tài): 上皮細(xì)胞樣
細(xì)胞特性: 貼壁
細(xì)胞融合度: 95%(Viability by Trypan Blue Exclusion)
細(xì)胞: 細(xì)胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌
"細(xì)胞培養(yǎng)三不要:
養(yǎng)科研細(xì)胞是生物醫(yī)學(xué)研究的基本功。有三個小經(jīng)驗可以和大家分享一下:
1. 不要燒瓶口。大多數(shù)人都喜歡在酒精燈的火焰上關(guān)瓶子,覺得這樣可以避免污染。不知道大家是不是有培養(yǎng)基怎么越用越發(fā)紫的困惑?知道為什么嗎?燒瓶口燒的。培養(yǎng)基一般都是用碳酸/碳酸氫跟作緩沖體系。瓶口在火焰上的時候,熾熱的空氣進入瓶內(nèi)。塞緊塞子放入冰箱后,空氣變冷,壓力驟降,培養(yǎng)基中的碳酸就會轉(zhuǎn)化成二氧化碳,釋放出來。培養(yǎng)基中的碳酸少了,當(dāng)然會變堿。如果不燒瓶口的話,你會發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液變堿的速度會大大減慢。(當(dāng)然多多少少還是會有一點越用越堿,因為室溫還是比冰箱內(nèi)的溫度高)
其實燒瓶口防止污染純粹是心理安慰。不妨試一下把手指在火上晃幾下,你會發(fā)現(xiàn)根本就不會燒疼。如果有細(xì)菌的話,這么晃兩下也燒不死多少。要想燒死全部細(xì)菌,除非把瓶口和塞子燒紅。我在國內(nèi)從來就不燒瓶口。來美國以后發(fā)現(xiàn)這里更*,超凈臺內(nèi)根本就不點酒精燈。
2. 不要頻繁看細(xì)胞。對于初學(xué)者而言,養(yǎng)細(xì)胞就像養(yǎng)孩子一樣,有空就要去看看。細(xì)胞越是養(yǎng)不好,就越是經(jīng)常去看。實際上看細(xì)胞對細(xì)胞的生長沒有任何好處,細(xì)胞特別是對原代細(xì)胞或是免疫磁珠分選后,密度特別低的細(xì)胞。培養(yǎng)基中的生長因子是非常有限的。細(xì)胞好不容易自分泌一點兒促生長的因子在其周圍,形成有利于生長的局部環(huán)境。你跑去看細(xì)胞,培養(yǎng)瓶這么一晃,把因子都給晃散了。經(jīng)??梢钥吹叫率忠惶斓酵矶荚诳醇?xì)胞,細(xì)胞老是長不好。老手細(xì)胞一扔好幾天不管,細(xì)胞瘋長。
3. 不要怕消化。在傳代的時候,初學(xué)者往往生怕細(xì)胞消化過度,早早地終止消化。細(xì)胞沒下來就使勁吹燈,吹得滿瓶子都是氣泡。在我看來,用力吹打?qū)?xì)胞的損傷比消化更大。我?guī)熜衷谧鲅芷交≡臅r候,37度消化過夜,細(xì)胞也沒事。我一般是等細(xì)胞*變圓后才中止消化。細(xì)胞輕輕一晃就能下來。還有,動作要輕柔,盡量不要產(chǎn)生氣泡。氣泡在破裂時的應(yīng)力相當(dāng)大,對細(xì)胞的傷害也是很大的。" 詳見細(xì)胞說明書
傳代方法: 建議1:2-1:3 兩天換液一次
凍存條件: 詳見細(xì)胞說明書
主要文獻: 請具體查閱相關(guān)發(fā)表文章
細(xì)胞培養(yǎng)方面注意的幾點:
無菌意識要強:實驗進行前,超凈臺以紫外燈照射30分鐘滅菌,以70 % ethanol擦拭無菌操作抬面,并開啟超凈工作臺風(fēng)扇運轉(zhuǎn)數(shù)分鐘后,才開始實驗操作。
每次操作只處理一株細(xì)胞株,以避免失誤混淆或細(xì)胞間污染。實驗完畢后,將實驗物品帶出工作臺,以70 % ethanol擦拭無菌操作抬面。
無菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔及寬敞,必要物品,例如支架、吸管等公用物品可以暫時放置,其它個人實驗用品用完應(yīng)立即拿出。實驗用品以70%乙醇擦拭后才帶入無菌操作臺內(nèi)。實驗操作應(yīng)在中央無菌區(qū)域,一般勿在邊緣區(qū)域操作。
小心取用無菌之實驗物品,避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口,亦不要在打開之容器正上方操作實驗。容器打開后,以手夾住瓶蓋并握住瓶身,傾斜約 45°角取用,盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。
細(xì)胞選擇正確的培養(yǎng)基:不同的細(xì)胞可能培養(yǎng)基不同,甚至不同的文獻可能對相同的細(xì)胞培養(yǎng)基成分也是可能不同的。如我當(dāng)時培養(yǎng)神經(jīng)干細(xì)胞,有文獻就選用neurobase培養(yǎng)基,而我的實驗?zāi)康闹饕亲隹寡趸脱趸矫娴?,而這種培養(yǎng)基中含有抗氧化劑成分,此時,我就不得不選擇另外一種不含抗氧化劑的培養(yǎng)基。
瓶裝血清一定要逐步解凍: 4℃冰箱全溶后再分裝,在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沉淀的發(fā)生。勿直接由–20℃直接至37℃ 解凍,因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。
熱滅活是指56℃,30分鐘加熱已*解凍之血清。水浴鍋升到56℃后,將血清放入,待溫度升高到56℃后計時,一般5分鐘左右規(guī)則搖晃均勻一次。此熱處理之目的是使血清中之補體成份去活化。除非必須,一般不要作此熱處理,因為會造成沉淀物之顯著增多,且會影響血清之品質(zhì)。注意更換新血清(包括不同批次)對細(xì)胞的影響。C1616 HT-144細(xì)胞 ,公司提供背景資料、生物體、生長特性、來源、器官、類型、形態(tài)、培養(yǎng)條件、應(yīng)用、系、疾病、組織、凍存條件等復(fù)蘇及凍存說明書信息,我們擁有豐富的細(xì)胞系培養(yǎng)經(jīng)驗,能提供細(xì)胞培養(yǎng)*的技術(shù)支持,讓您實驗再無煩擾!
FaDu人咽鱗癌細(xì)胞
操作步驟:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補加1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細(xì)胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,細(xì)胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細(xì)胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液,注意凍 存管做好標(biāo)識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
注意事項:
1.動作要快,胰酶消化,換液什么,細(xì)胞暴露在空氣中的時間越少越好。另外,要掌握好胰酶消化時間,所謂的細(xì)胞狀態(tài)差,很多時候是傳代的原因。
3.有時間的話,需要細(xì)胞計數(shù),傳相應(yīng)數(shù)目的細(xì)胞到培養(yǎng)皿中,可以大致清楚細(xì)胞的生長曲線,不會臨時要處理,手足無措。
3.要做什么心里要非常清楚,合理安排時間,細(xì)胞房的實驗穿插進行,可以節(jié)省很多時間,也不會耽誤別人的實驗。
4.個人的實驗器具自己收一套,不要和別人混用,zui近換了什么新的東西稍微記一下,試劑一旦懷疑污染,馬上丟。
5.細(xì)胞房不能進去太多人,避免相互干擾。