Romas人B淋巴細(xì)胞瘤細(xì)胞

Romas人B淋巴細(xì)胞瘤細(xì)胞

根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)的特點(diǎn)，傳代方法有3種：

（1）懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞傳代

離心法傳代：離心（1000轉(zhuǎn)/分）去上清，沉淀物加新培養(yǎng)液后再混勻傳代。

直接傳代法：懸浮細(xì)胞沉淀在瓶壁時(shí)，將上清培養(yǎng)液去除1/2-2/3，然后用吸管直接吹打形成細(xì)胞懸液再傳代。

（2）半懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞傳代（HeIa細(xì)胞）

此類細(xì)胞部分呈現(xiàn)貼壁生長(zhǎng)現(xiàn)象，但貼壁不牢，可用直接吹。

打法使細(xì)胞從瓶壁脫落下來(lái)，進(jìn)行傳代。

（3）貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞傳代

采用酶消化法傳代，常用的消化液有0.25%的胰蛋白酶液。xy-6437R    ANKRD53錨蛋白重復(fù)域53抗體

懸浮細(xì)胞接收后的操作流程與注意事項(xiàng)
1.如簽收時(shí)出現(xiàn)培養(yǎng)瓶壁破裂，漏液等情況請(qǐng)及時(shí)做好照片記錄并聯(lián)系實(shí)驗(yàn)室 
2.擰松瓶蓋，細(xì)胞瓶豎立培養(yǎng)8h（或過(guò)夜）
3.待細(xì)胞沉底后吸除上層液體（含碎片殘?jiān)?，?qǐng)小心操作），然后吸取沉底的細(xì)胞層（2ML左右轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶，加入新鮮的*培養(yǎng)基（如細(xì)胞狀態(tài)較差可將血清濃度調(diào)高到15%）繼續(xù)培養(yǎng)
 
懸浮細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程（請(qǐng)嚴(yán)格遵照無(wú)菌操作）
1.將培養(yǎng)瓶/皿中的細(xì)胞重懸混勻
2.吸取2/3或者一半混勻后的細(xì)胞懸液到新的培養(yǎng)瓶/皿
3.分別在原瓶/皿和新分瓶的培養(yǎng)瓶/皿加入等量或者2倍的新鮮培養(yǎng)基，使細(xì)胞密度保持在5 X10(5) /ml左右
4.注意培養(yǎng)基PH值變化情況和細(xì)胞密度，定期半量換液（每周2-3次），待細(xì)胞密度大于2 X 10(6) /ml以后重復(fù)1項(xiàng)操作或者凍存

Romas人B淋巴細(xì)胞瘤細(xì)胞

貼壁細(xì)胞接收后的操作流程與注意事項(xiàng)
1.收到細(xì)胞當(dāng)天盡快更換新鮮*培養(yǎng)基，第二天再進(jìn)行消化處理
2.如果細(xì)胞收到時(shí)呈懸浮或者部分懸浮的狀態(tài)，請(qǐng)將懸浮的細(xì)胞即時(shí)離心，加15%血清的*培養(yǎng)基到新的培養(yǎng)皿/瓶繼續(xù)培養(yǎng)觀察。同時(shí)原培養(yǎng)瓶中剩下的貼壁細(xì)胞更換為15%血清的*培養(yǎng)基，培養(yǎng)觀察
3.若出現(xiàn)生長(zhǎng)不均：貼壁細(xì)胞若出現(xiàn)分布不均，成島狀生長(zhǎng)，可將細(xì)胞進(jìn)行消化，重懸打散細(xì)胞，加入新鮮培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)

貼壁細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程（請(qǐng)嚴(yán)格遵照無(wú)菌操作）
1.吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次，加適量0.25%胰酶進(jìn)行消化細(xì)胞（注意把握消化時(shí)間）
2.鏡下觀察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁松動(dòng)時(shí)（不建議消化到細(xì)胞漂?。┤サ粢让福?~8ml *培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，盡量把細(xì)胞層吹落，吹散
3.取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當(dāng)?shù)?培養(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)
4.注意培養(yǎng)基PH值變化情況，定期換液（每周2-3次），待細(xì)胞密度達(dá)到80%以后重復(fù)1項(xiàng)作或者凍存