胎牛血清

 　　GIBCO胎牛血清細(xì)胞凍存步驟：

　　1、在冷凍管上標(biāo)記好日期、研究者姓名、細(xì)胞數(shù)、細(xì)胞傳代數(shù)和細(xì)胞類型（以及任何其他有用信息，比如遺傳修飾）。

　　2、如果細(xì)胞貼壁，則去除細(xì)胞培養(yǎng)基，用 PBS 洗滌，加入足量胰蛋白酶覆蓋細(xì)胞并在 37°C 培養(yǎng)箱中孵育約 2 分鐘。在細(xì)胞培養(yǎng)基中重懸細(xì)胞并移入 50 mL Falcon 管中。

　　3、如果細(xì)胞為懸浮狀態(tài)，只需將所需體積細(xì)胞直接移入 50 mL Falcon 管中。

　　4、用血細(xì)胞計(jì)數(shù)器進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)以確定其活力。用于冷凍保存的細(xì)胞活力至少應(yīng)為 75%。

　　5、在室溫下以 1,000 rpm 離心 5 分鐘。

　　6、去除上清液，輕輕散開(kāi)沉淀物。

　　7、添加冷凍培養(yǎng)基至所需的細(xì)胞密度。對(duì)于哺乳動(dòng)物細(xì)胞，所需細(xì)胞密度通常為10^6/mL 冷凍培養(yǎng)基。在室溫下，細(xì)胞不應(yīng)在冷凍培養(yǎng)基中超過(guò) 10 分鐘。

　　8、在各冷凍管中各分裝 1 mL，并蓋緊蓋子。

　　9、室溫下將冷凍管移至 CoolCell 快速冷凍機(jī)中，然后放入 -80°C 冰箱中。CoolCell 快速冷凍機(jī)將確保溫度以 1°C/分鐘穩(wěn)步下降。

　　10、大約 24 小時(shí)后，從 CoolCell 快速冷凍機(jī)中取出冷凍管并轉(zhuǎn)移到液氮中長(zhǎng)期儲(chǔ)存。

　　更換GIBCO胎牛血清有技巧：

　　a.不同來(lái)源或不同批次GIBCO血清的更換：在一個(gè)批次的血清快使用完畢，需更換使用不同來(lái)源或不同批次的血清時(shí)，宜讓細(xì)胞有一個(gè)逐步適應(yīng)新血清的過(guò)程，這樣就幾乎不會(huì)因?yàn)楦鼡Q血清而影響細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)。具體的方法是，在初始使用舊批次血清的情況下，逐漸增加不同來(lái)源或不同批次血清的比例，例如把不同來(lái)源或不同批次血清的比例逐步調(diào)整為0%、30%、60-70%、100%。這樣經(jīng)過(guò)約3代細(xì)胞的逐漸適應(yīng)，細(xì)胞通常會(huì)在新來(lái)源或新批次的血清中生長(zhǎng)良好。

　　b.從GIBCO血清更換成新生牛血清：有的些細(xì)胞，如HEK293、HEK293T、HeLa、CHO-K1、NIH3T3等常見(jiàn)細(xì)胞株通常是可以用新生牛血清培養(yǎng)的。如果之前是使用胎牛血清，想更換為新生牛血清培養(yǎng)，也需要讓細(xì)胞有一個(gè)逐步適生牛血清的過(guò)程。例如把新生牛血清的比例逐步調(diào)整為0%、30%、60-70%、100%。對(duì)于不太確定是否適合新生牛血清培養(yǎng)的細(xì)胞。

血清真假辨別：

　　一、外觀

　　拿到血清，先接觸的是血清外觀，對(duì)于缺少細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)的人來(lái)說(shuō)，外觀的判斷尤為重要

　　1、GIBCO血清顏色

　　根據(jù)血紅蛋白含量的不同，胎牛血清可表現(xiàn)出黃色或紅色，我國(guó)的細(xì)胞培養(yǎng)用血清標(biāo)準(zhǔn)是不高于20mg/dl，實(shí)際上，血紅蛋白含量的高低對(duì)血清并無(wú)直接影響，這個(gè)指標(biāo)的意義在于能體現(xiàn)出采血過(guò)程的嚴(yán)謹(jǐn)規(guī)范程度，良好的操作能降低血清的溶血。

　　假的血清的采血點(diǎn)很分散，大多是由屠戶采血后馬上離心收集，所以很少會(huì)有溶血，表現(xiàn)出明亮的蠟黃色，當(dāng)然，假的血清也很少有標(biāo)準(zhǔn)意義上的胎牛血清。

　　進(jìn)口血清或多或少總有點(diǎn)溶血，因?yàn)檎嬲难迥δ懿?，紅細(xì)胞容易破裂。

　　總的來(lái)說(shuō)，假的的血清呈現(xiàn)出蠟黃。進(jìn)口的血清，質(zhì)量好的呈現(xiàn)出談黃、微紅色，差點(diǎn)的呈現(xiàn)出橘紅色或鮮紅色。當(dāng)然，熱滅活血清或保存不當(dāng)?shù)难?，由于血紅蛋白的破壞氧化，會(huì)呈現(xiàn)出暗紅，甚至咖啡色。

　　2、GIBCO血清沉淀

　　很多血清客戶，會(huì)發(fā)現(xiàn)進(jìn)口血清有沉淀，從而懷疑血清的質(zhì)量問(wèn)題，這是沒(méi)有根據(jù)的。

　　血清中的沉淀是由纖維蛋白的凝聚產(chǎn)生，對(duì)血清質(zhì)量沒(méi)有任何影響，沉淀的產(chǎn)生原因很多，和廠家的加工生產(chǎn)方式密切相關(guān)。

　　假的的血清，大多來(lái)自北方，由于價(jià)格低廉，保存環(huán)境都不好，從采血、冷凍、運(yùn)輸?shù)缴a(chǎn)會(huì)經(jīng)過(guò)多次凍融，每次凍融過(guò)程，就會(huì)析出部分纖維蛋白沉淀，這樣，血清成品過(guò)濾后看起來(lái)反而更加的“干凈”，很少有沉淀產(chǎn)生。

　　GIBCO血清過(guò)濾分裝前很少會(huì)反復(fù)凍融，生產(chǎn)后的成品也是清澈的，但隨著時(shí)間的推移，血清中的大量纖維蛋白會(huì)析出形成沉淀。當(dāng)然，進(jìn)口的新生牛血清，一般牛齡都在2周左右，血清中的各種蛋白含量明顯偏高，生產(chǎn)后血清可能會(huì)渾濁，甚至有大量沉淀。

　　當(dāng)然，購(gòu)買回來(lái)的血清都是冰凍狀態(tài)，使用時(shí)需要融化，融化過(guò)程好在溫度較低的狀態(tài)下慢慢進(jìn)行，否則沉淀相對(duì)較多，雖然沉淀并不直接影響血清的質(zhì)量，但對(duì)細(xì)胞的顯微觀察有一定的阻礙。