LS1034人結(jié)直腸癌細胞
解凍細胞常見實驗問題分析及推薦解決方法:
在解凍凍存細胞時,發(fā)現(xiàn)會出現(xiàn)存活率低、大量細胞碎片及生長緩慢等問題,究竟是什么原因?qū)е?,我們該怎么進行解決?以下是國內(nèi)外細胞培養(yǎng)專家針對解凍細胞實驗問題,總結(jié)的一些解決方案!
出現(xiàn)低存活率的可能原因及推薦解決方案如下:
1.解凍過程中細胞裂解
推薦的解決方案:可預期到一定量的細胞死亡,因此細胞的濃度應足夠高,考慮到這一損失。起始濃度為1*10(6)至1*10(7)細胞/毫升。
2.解凍過程中的問題
推薦的解決方案:在-70℃至-80℃下保存冷凍的培養(yǎng)物,保存時間為1-5天,但這不是保存的方法。在37℃充分解凍后應立即開始培養(yǎng)。
3.對冷凍液過敏
推薦的解決方案:A.*或部分更換培養(yǎng)基,減少培養(yǎng)基中冷凍液的量。在24小時后更換培養(yǎng)液體可全部去除冷凍液。B.留出更多時間供培養(yǎng)物恢復。有時細胞需要幾周時間才能形成單層或密集的懸浮物,取決于冷凍時細胞的年齡或傳代次數(shù)或在生長階段中的位置。冷凍的條件在對數(shù)期。
4.被冷凍的原種細胞的年齡或冷凍時培養(yǎng)物的年齡
推薦的解決方案:解凍最近冷凍的細胞。細胞處于冷凍狀態(tài)的時間越長,存活率越低。檢查冷凍細胞的時間和方法。在冷凍時細胞應處于對數(shù)期。
出現(xiàn)大量細胞碎片的可能原因及推薦解決方案如下:
1.冷凍時細胞密度過低:推薦的解決方案:縮短解凍過程中的時間。將細胞取出后,立即將凍存管浸入在37℃的水浴中,并震蕩至全部融化,然后迅速地轉(zhuǎn)移到預熱的培養(yǎng)基中。
2.不適當?shù)睦鋬鲞^程:推薦的解決方案:解凍不同冷凍室總的試管。確保在凍存過程中采用的適當?shù)募夹g(shù),并確保使用了適量和適合的冷凍液。
出現(xiàn)生長緩慢的可能原因及推薦解決方案如下:
1.培養(yǎng)瓶的大?。阂话憬鉀Q方案是一些細胞在培養(yǎng)基中傾向于維持一定的密度。將培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移到較小的培養(yǎng)瓶中,使細胞密度上升;如,根據(jù)培養(yǎng)基的體積,從T75培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)移到2或3個T25培養(yǎng)瓶中。
2.細胞密度過低:通常解決方案是提高未來冷凍物種細胞的凍存密度,或使用較小的培養(yǎng)容器,或解凍多個試管來進行培養(yǎng)。
LS1034人結(jié)直腸癌細胞
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