Noverse 南美源胎牛血清開(kāi)學(xué)*

Noverse 南美源胎牛血清開(kāi)學(xué)*?

適合用于常規(guī)細(xì)胞原代細(xì)胞以及干細(xì)胞的培養(yǎng)
內(nèi)毒素含量極低 <3EU/ml(規(guī)定：特級(jí)胎牛血清<10 EU/ml)
極利于細(xì)胞的生長(zhǎng)和傳代 ，適合各種細(xì)胞培養(yǎng)
七次無(wú)菌過(guò)濾，zui后三次為0.1 µm無(wú)菌過(guò)濾處理
進(jìn)行細(xì)菌、真菌、支原體、病毒及病毒抗體檢測(cè)，符合動(dòng)物協(xié)會(huì)要求

細(xì)胞介紹

該細(xì)胞對(duì)乳汁珠和激活的紅細(xì)胞有吞噬作用，無(wú)表面和胞質(zhì)免疫球蛋白。可以用佛波醇 TPA誘導(dǎo)單核細(xì)胞分化。

細(xì)胞特性

1. 來(lái)源：急性單核細(xì)胞白血病，單核細(xì)胞

2. 形態(tài)：單核細(xì)胞，懸浮 

細(xì)胞培養(yǎng)步驟

【細(xì)胞貨號(hào)】 C5003

【細(xì)胞縮寫】 RAW 264.7細(xì)胞

【細(xì)胞名稱】 RAW 264.7(小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞)

【背景資料】 此細(xì)胞株源自Abelson鼠科白血病病毒誘導(dǎo)的腫瘤。 sIg-, Ia-抗原、Thy-1.2表面抗原陰性。此細(xì)胞株不分泌可檢測(cè)到的病毒顆粒，XC斑點(diǎn)形成試驗(yàn)陰性。 可以胞飲中性紅并吞噬乳膠顆粒與酵母聚糖。 可以抗體依賴性地分解綿羊紅血球與腫瘤靶細(xì)胞。 LPS或PPD處理2天可誘導(dǎo)分解紅血球但對(duì)腫瘤靶細(xì)胞無(wú)作用。

【組織來(lái)源】 Abelson鼠科白血病病毒誘導(dǎo)的腫瘤；單核細(xì)胞；巨噬細(xì)胞

【細(xì)胞形態(tài)】 不規(guī)則圓形

【細(xì)胞特性】 貼壁

【細(xì)胞活力】 95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）

【細(xì)胞檢測(cè)】 細(xì)胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌

【培養(yǎng)條件】 詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)

【傳代方法】 建議1:2-1:3 兩天換液一次

【凍存條件】 詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)

【主要文獻(xiàn)】 請(qǐng)具體查閱相關(guān)發(fā)表文章

血清中包含絮狀沉淀，它們是什么，怎么處理?

沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白。這是正常特性，不會(huì)影響產(chǎn)品性質(zhì)。要除去沉淀，離心血清(400g，1-2分鐘)或者簡(jiǎn)單的讓其沉淀在瓶子底部，將血清小心的轉(zhuǎn)移到另一個(gè)無(wú)菌瓶里(一般不建議采用過(guò)濾的方法除去沉淀，因?yàn)槌恋頃?huì)堵塞濾膜而無(wú)法過(guò)濾)。大多情況輕輕搖動(dòng)沉淀并加熱至37℃就會(huì)再溶解。所以，使用產(chǎn)品時(shí)要搖動(dòng)并加熱血清至37℃，沉淀會(huì)自然消失。

 如何避免血清中產(chǎn)生沉淀?

按如下操作可避免沉淀的產(chǎn)生：

(1)解凍血清時(shí)，請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生。

(2) 血清分裝凍存時(shí)，須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡)，使溫度與成分均一。

(3) 勿直接由-20℃直接至37℃解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。

(4) 勿將血清置于37℃太久，否則血清會(huì)變得渾濁，同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成份也會(huì)因此受到破壞，從而影響血清的品質(zhì)。

(5) 血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無(wú)須做此步驟。

(6) 若必須做血清的熱滅活，請(qǐng)遵守56℃，30分鐘的原則，并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過(guò)高，時(shí)間過(guò)久或搖晃不均勻，都會(huì)造成沉淀物的增多。

 培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素后，可長(zhǎng)期保存嗎?

一旦您在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時(shí)，您應(yīng)該在兩到三周內(nèi)使用它。因?yàn)橐恍┛股睾脱逯械幕境煞衷诮鈨龊缶烷_(kāi)始降解。

 為什么要熱滅活血清?

加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng)。激活的補(bǔ)體參與溶解細(xì)胞事件，刺激平滑肌收縮，細(xì)胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。在免疫學(xué) 研究，培養(yǎng)ES細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞時(shí)，推薦使用熱滅活血清。

 有必要做熱滅活嗎?

實(shí)驗(yàn)顯示，經(jīng)過(guò)正確處理的熱滅活血清，對(duì)大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過(guò)的血清對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)只有微小的促進(jìn)，或*沒(méi)有任何作用，甚至通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量，而造成細(xì)胞生長(zhǎng)速率的降低。而經(jīng)過(guò)熱處理的血清，沉淀物的形成會(huì)顯著的增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察，像是“小黑點(diǎn)”，常常會(huì)讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37℃環(huán)境中，又會(huì)使此沉淀物更增多，使研究者誤認(rèn)為是微生物 的分裂擴(kuò)增。

若非必須，可以不需要做熱處理這一步。不但節(jié)省時(shí)間，更確保血清的質(zhì)量!

細(xì)胞培養(yǎng) 中出現(xiàn)黑點(diǎn)是污染嗎?如何處理?

一旦您在細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)有黑點(diǎn)生成，首先，要肉眼觀察培養(yǎng)基是否混濁，然后，在鏡下觀察培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)的狀態(tài)，黑點(diǎn)是否游動(dòng)。如果細(xì)胞被污染，微生物則會(huì)大量繁殖，培養(yǎng)基就會(huì)迅速變黃、變混濁。污染包括細(xì)菌污染、支原體污染等。

如果在鏡下觀察細(xì)胞，生長(zhǎng)狀態(tài)良好，與黑點(diǎn)出現(xiàn)前相比，沒(méi)有任何變化，那么，黑點(diǎn)的出現(xiàn)可能與以下幾種情況有關(guān)：

(1)細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)老，破碎的細(xì)胞殘骸;

(2)血清質(zhì)量不好，反復(fù)凍融的結(jié)果;

(3)配制培養(yǎng)基的pH值偏高，不宜細(xì)胞生長(zhǎng);

(4)配制培養(yǎng)基的水質(zhì)、容器不合格?？蓱?yīng)用離心、過(guò)濾的方法去除這些黑點(diǎn);

(5)培養(yǎng)原代細(xì)胞中出現(xiàn)小黑點(diǎn)，可能是原代組織中的雜質(zhì)，多次傳代可以消除。

 細(xì)胞培養(yǎng)中如何防止黑點(diǎn)生成?

(1) 盡可能地減少血清凍融次數(shù)。

(2) 培養(yǎng)基無(wú)需37℃水浴。

(3) 培養(yǎng)基保持PH值7.0- 7.2。

(4) 嚴(yán)格控制配制培養(yǎng)基的水質(zhì)，容器定期刷洗。

(5) 掌握細(xì)胞傳代的時(shí)機(jī)，細(xì)胞切勿生長(zhǎng)過(guò)老。

適合用于常規(guī)細(xì)胞原代細(xì)胞的培養(yǎng)
內(nèi)毒素含量極低 <3EU/ml(規(guī)定：特級(jí)胎牛血清<10 EU/ml)
極利于細(xì)胞的生長(zhǎng)和傳代 ，適合各種細(xì)胞培養(yǎng)
七次無(wú)菌過(guò)濾，zui后三次為0.1 µm無(wú)菌過(guò)濾處理
進(jìn)行細(xì)菌、真菌、支原體、病毒及病毒抗體檢測(cè)，符合動(dòng)物協(xié)會(huì)要求

血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，且血清組成及含量常隨供血?jiǎng)游锏男詣e、年齡、生理?xiàng)l件和營(yíng)養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長(zhǎng)因子、激素、無(wú)機(jī)物等，這些物質(zhì)對(duì)促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)或抑制生長(zhǎng)活性是達(dá)到生理平衡的

牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中用量zui大的天然培養(yǎng)基，含有豐富的細(xì)胞生長(zhǎng)必須的營(yíng)養(yǎng)成份，常用于動(dòng)物細(xì)胞的體外培養(yǎng)，具有極為重要的功能。

1.提供對(duì)維持細(xì)胞指數(shù)生長(zhǎng)的激素，基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒(méi)有或量很少的營(yíng)養(yǎng)物，以及主要的低分子營(yíng)養(yǎng)物。

2. 提供結(jié)合蛋白，能識(shí)別維生素、脂類、金屬和其他激素等，能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。

3.有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合，起到解毒作用。

4.是細(xì)胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來(lái)源。

5.起酸堿度緩沖液作用。

6.提供蛋白酶抑制劑，使在細(xì)胞傳代時(shí)使剩余胰蛋白酶失活，保護(hù)細(xì)胞不受傷害。

1、如發(fā)現(xiàn)血清渾濁，不透明，含許多沉淀物，說(shuō)明血清污染或血清中的蛋白質(zhì)變性，若棕紅色，說(shuō)明血清中的血紅蛋白含量太高，有溶血現(xiàn)象。

2、總蛋白含量

胎牛血清一般范圍是30-40mg/ml，數(shù)值偏高，說(shuō)明采血的牛齡偏大，不是胎牛，數(shù)值偏低，表明血清可能摻水了。

3、血紅蛋白

標(biāo)準(zhǔn)為不高于20mg/dl，顏色越紅，數(shù)值越高，反之，數(shù)值越低。

4、pH

國(guó)產(chǎn)血清，大多高于7.5，進(jìn)口胎牛血清，大多低于7.5，具體原因未知，可能和牛齡有關(guān)，這也能用來(lái)初步鑒別血清的來(lái)源。

5、微生物

包括細(xì)菌、霉菌、支原體、噬菌體、各類病原性病毒等。隨著國(guó)內(nèi)血清廠家生產(chǎn)條件的改善提高，細(xì)菌、霉菌等“大型”微生物幾乎能100%控制，支原體經(jīng)過(guò)0.1um過(guò)濾，大多也能清除。大腸桿菌噬菌體的污染還是比較嚴(yán)重的，主要是生產(chǎn)環(huán)境過(guò)程中帶入，又無(wú)法過(guò)濾，很難*清除，但對(duì)血清質(zhì)量影響不大。病原性病毒，特別是BVDV，在國(guó)產(chǎn)血清中幾乎90%以上都存在，這類微生物是影響國(guó)產(chǎn)血清質(zhì)量的重要因素之一，而進(jìn)口胎牛血清中基本都控制的很好。

6. 免疫球蛋白

國(guó)產(chǎn)血清的只是定性檢測(cè)，結(jié)果也很不準(zhǔn)確，進(jìn)口胎牛血清大多定量檢測(cè)。免疫球蛋白的數(shù)值能*體現(xiàn)出采血的時(shí)的牛齡情況，國(guó)產(chǎn)血清，基本都是新生牛的，血清中容易產(chǎn)生IgM，IgG的含量也偏高，進(jìn)口胎牛血清，不含IgM，IgG的含量也較低。

不管是國(guó)產(chǎn)還是進(jìn)口血清，都是不測(cè)抗生素的（無(wú)四環(huán)素胎牛血清除外）。國(guó)外，抗生素的使用很嚴(yán)格，用量也很少，每頭奶牛的產(chǎn)品包括血清都可以溯源的，因此可以做到胎牛血清中不含抗生素或含量極低;國(guó)內(nèi)，抗生素的濫用已成了普遍現(xiàn)象，國(guó)產(chǎn)血清中殘留很高，對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)極為不利，這是國(guó)產(chǎn)血清質(zhì)量差的根本原因。

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