人源細(xì)胞系作為體外模型而被廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究。正確數(shù)據(jù)的獲得常依賴(lài)于細(xì)胞系的特性,尤其是當(dāng)它用來(lái)替代其來(lái)源者的組織時(shí)。 人源細(xì)胞系常規(guī)培養(yǎng)傳代流程:
?。?)吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,PBS緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次,加2-3ml 0.25%胰酶進(jìn)行消化細(xì)胞(注意把握消化時(shí)間,通??刂圃?-2min)
?。?)注意培養(yǎng)基PH值變化情況,定期換液(每周2-3次),待細(xì)胞密度達(dá)到80%以后重復(fù)1項(xiàng)操作或者凍存
?。?)取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中,添加適當(dāng)?shù)?培養(yǎng)基,把細(xì)胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)
?。?)鏡下觀(guān)察消化情況,在HS505.T人淋巴結(jié)成纖維樣細(xì)胞生長(zhǎng)特性邊緣縮小,貼壁松動(dòng)時(shí)(不建議消化到細(xì)胞漂?。┤サ粢让?,加6-8ml*培養(yǎng)基,輕輕吹打細(xì)胞層,盡量把細(xì)胞層吹落,吹散。
人源細(xì)胞系的培養(yǎng)注意事項(xiàng):
1.傳代培養(yǎng)時(shí)要注意無(wú)菌操作并防止細(xì)胞之間的交叉污染,所有操作要盡量靠近酒精燈火焰。每次只進(jìn)行一種細(xì)胞的操作。每一種細(xì)胞使用一套器材,培養(yǎng)用液應(yīng)嚴(yán)格分開(kāi)。
2.每天觀(guān)察細(xì)胞形態(tài),掌握好細(xì)胞是否健康的標(biāo)準(zhǔn):健康細(xì)胞的形態(tài)飽滿(mǎn),折光性好,生長(zhǎng)致密時(shí)即可傳代。
3.如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有污染跡象,應(yīng)立即采取措施,一般應(yīng)棄置污染的細(xì)胞,如果必須挽救,可加含有抗生素的BSS或培養(yǎng)基反復(fù)清洗,隨后培養(yǎng)基中加入較大量的抗菌素,并經(jīng)常更換培養(yǎng)基等。
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