01、血清的顏色如何?
為何有的胎牛血清顏色偏紅,而有的偏黃?是因?yàn)樘ヅQ孱伾怯裳t蛋白(鮮紅)和膽紅素(黃)決定的,主要是受血紅蛋白影響。血紅蛋白含量很低時(shí),含少量膽紅素,呈淡黃或金黃。血紅蛋白含量高時(shí),會(huì)呈現(xiàn)淡紅色。
需要長(zhǎng)期保存的血清必須儲(chǔ)存于-20℃冰箱(未開(kāi)封血清有效期為5年)。若存放于4℃,請(qǐng)勿超過(guò)1個(gè)月,若一次無(wú)法用完一瓶,建議將血清無(wú)菌分裝并冷凍。
02、血清如何解凍,使用前是否需要過(guò)濾?
血清解凍需采用逐步解凍法:將血清從-20℃冰箱放入4℃冰箱中溶解一天,然后移入室溫,待全部溶解后再分裝。在溶解過(guò)程中需不斷輕輕搖晃均勻(小心勿造成氣泡),減少沉淀生成。切勿直接將血清從-20℃轉(zhuǎn)入37℃解凍,這樣因溫差較大易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)并出現(xiàn)沉淀。
經(jīng)過(guò)3次0.1μm過(guò)濾,出廠經(jīng)過(guò)檢測(cè)并且會(huì)使用三種以上的細(xì)胞株進(jìn)行培養(yǎng)測(cè)試及無(wú)菌檢測(cè),污染幾率非常非常非常(重要的事情說(shuō)三遍)低。通常細(xì)胞污染有非常多的可能性,根據(jù)協(xié)助使用者進(jìn)行分析檢測(cè),結(jié)果表明絕大部分都是因人為操作失誤導(dǎo)致污染。因此買(mǎi)來(lái)的血清不需要再次進(jìn)行過(guò)濾。
肉眼和光學(xué)顯微鏡所能觀察到的微粒大小。由于我們的血清是經(jīng)過(guò)3次0.1μm過(guò)濾,因此若肉眼可以觀察到異物時(shí),可以考慮:
是否血清溶解后蛋白質(zhì)凝集
是否操作時(shí)導(dǎo)入污染物
03、為什么血清中會(huì)有沉淀生成,主要成分是什么,會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)有什么影響?
血清中沉淀主要有:纖維蛋白(絮狀沉淀),胎球蛋白[1],脂蛋白,冷凝集素,玻連蛋白,磷酸鈣(顯微鏡下小黑點(diǎn)沉淀),膽固醇等。
原因:造成沉淀的主要原因是溫度的改變。熱滅活,反復(fù)凍融,長(zhǎng)期儲(chǔ)存于2-8℃或者室溫。
預(yù)防:非必要,不用熱滅活;避免反復(fù)凍融;-20℃保存;4℃全融(期間間斷搖晃均勻);2000rpm離心5分鐘(不建議用0.2um濾膜過(guò)濾) ,取上清使用。
04、黑膠蟲(chóng)是來(lái)源于血清嗎?
目前科學(xué)界對(duì)黑膠蟲(chóng)的身份并無(wú)定論, 通常是顯微鏡下觀察到密密麻麻的小黑點(diǎn)在培養(yǎng)基中自主游動(dòng),就稱(chēng)為黑膠蟲(chóng)污染。本公司技術(shù)服務(wù)部”Dr.Cell” 目前檢測(cè)的數(shù)十個(gè)所謂”黑膠蟲(chóng)”樣本,其中62%為細(xì)菌(如Sphingomonas paucimobilis,Blastomonas natatoria strain),38%為支原體(如:Mycoplasma hyorhinis,Mycoplasma pulmonis strain)。黑膠蟲(chóng)在鏡下的典型特征呈卵圓狀、球狀、桿狀等,可引起細(xì)胞生長(zhǎng)遲緩或裂解凋亡。目前沒(méi)有充分的數(shù)據(jù)表明黑膠蟲(chóng)來(lái)源于血清,因?yàn)槠涑叽邕h(yuǎn)大于血清過(guò)濾時(shí)所用的0.1微米(μm)濾膜。建議各位老師通過(guò)使用三抗(Cat#: 03-032-1B)外加支原體處理試劑(Cat#: 03-038-1B)嘗試殺滅黑膠蟲(chóng)。
05、血清存在批間差嗎?
因?yàn)檠鍋?lái)源于動(dòng)物,其組成成分有1000種左右,且血清組成及含量常隨供血?jiǎng)游锏男詣e、年齡、生理?xiàng)l件和營(yíng)養(yǎng)條件不同而異。每個(gè)批號(hào)的組分和百分比含量都是不固定的,所以批間差異是存在的。
建議先進(jìn)行批號(hào)測(cè)試,篩選出合適批號(hào),購(gòu)買(mǎi)半年甚至一年以上的用量,避免批間差造成實(shí)驗(yàn)波動(dòng)(胎牛血清在-20℃保存可達(dá)5年)。