GEC-1人胃黏膜上皮細胞
英文名稱:Human Gastric mucosal Epithelial Cells
規(guī)格:1*10 6
細胞介紹
該細胞是從9個月的胎兒胃上皮細胞中培養(yǎng)分離出來,經(jīng)過SV40病毒轉(zhuǎn)染后,篩選獲得。不能在裸鼠中成瘤,是在研究人胃腫瘤過程中一種重要的模式系統(tǒng)。
一、細胞特性
1) 來源:胃
2) 形態(tài):上皮樣,貼壁細胞
3) 含量:>1x106 個/mL
4) 污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5) 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝
二、細胞收到后處理
GEC-1人胃黏膜上皮細胞
(STR鑒定)在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿*培養(yǎng)液并封好瓶口是細胞運輸?shù)霓k法。收到細胞回到自己的實驗室后,先打開外包裝,用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內(nèi),嚴(yán)格無菌操作。鏡下觀察:未超過80%匯合度時,可將瓶裝的*培養(yǎng)液移入廢液缸中,原瓶(T25瓶)保留6-8ml*培養(yǎng)液,懸浮細胞需離心處理,放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng);超過80%匯合度時,根據(jù)情況傳代或者凍存,具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。
三、細胞培養(yǎng)步驟
1)復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?cm皿中,加入約6ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2)傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
1、對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
2、對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集,1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,進行離心收集,1000RPM條件下離心5分鐘,去除上清,按凍存數(shù)量加入血清及DMSO,凍存比例為90%FBS+10%DMSO。
出現(xiàn)問題,可重發(fā)的情況有哪些?判定標(biāo)準(zhǔn)是什么?
(1)細胞運輸途中遭遇的各種問題,細胞丟失、破損、漏液等,重發(fā);