TC-1小鼠肺上皮細(xì)胞

TC-1小鼠肺上皮細(xì)胞

細(xì)胞別名：TC-1細(xì)胞；小鼠肺上皮細(xì)胞 小鼠肺上皮細(xì)胞；TC-1細(xì)胞

生物安全水平：1

培養(yǎng)基&血清：見培養(yǎng)條件

生物體：小家鼠（小鼠）

來源：器官：肺

細(xì)胞接收后的操作流程與注意事項(xiàng)：

1、如簽收時(shí)出現(xiàn)培養(yǎng)瓶壁破裂、漏液等情況，請及時(shí)做好照片記錄并聯(lián)系我們。

2、擰松瓶蓋，細(xì)胞瓶豎立培養(yǎng)8h（或到第二天）

3、待細(xì)胞沉底后吸除上層液體（含碎片殘?jiān)?，請小心操作），然后吸取沉底的?xì)胞層（2ml左右）轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶。

4、加入新鮮的*培養(yǎng)基（如細(xì)胞狀態(tài)較差可將血清濃度調(diào)高到15%）繼續(xù)培養(yǎng)。

細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程（請嚴(yán)格遵照無菌操作）

1、將培養(yǎng)瓶/皿中的細(xì)胞重懸混勻。

2、吸取2/3或者一半混勻后的細(xì)胞懸液到新的培養(yǎng)瓶/皿。

3、分別在原瓶/皿和新分瓶的培養(yǎng)瓶/皿加入等量或者2倍的新鮮培養(yǎng)基，使細(xì)胞密度保持5×10（5）/ml左右。

4、注意培養(yǎng)基PH值變化情況和細(xì)胞密度，定期半量換液（每周2-3次），待細(xì)胞密度大于2×10（6）/ml以后重復(fù)1項(xiàng)操作或者凍存。

相關(guān)細(xì)胞資料：

培養(yǎng)條件：GIBCO(1640+10%胎牛血清)

培養(yǎng)環(huán)境：95%空氣；5%二氧化碳（CO2）

溫度：37.0℃

保存：凍存血清：95%*培養(yǎng)基；5%二甲基亞砜（DMSO）

儲(chǔ)存溫度：液氮

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明 
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法； 
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造，并經(jīng)過鉻酸洗液處理； 
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)*的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率； 
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

TC-1小鼠肺上皮細(xì)胞

細(xì)胞處理方法：

一、貼壁細(xì)胞
1、 接收到細(xì)胞，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞 100X,200X 各一張）。
2、用 75%的酒精消毒外包裝,在超凈工作臺(tái)內(nèi)打開外包裝。
3、嚴(yán)格遵循無菌操作規(guī)范，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4、37度平衡1-2小時(shí)。
5、用移液管吸取培養(yǎng)基，到50ml離心管中，剩下細(xì)胞密度達(dá)到80%至90%可以傳代，如沒有達(dá)到添加6ml新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
6、如果肉眼檢查上清有細(xì)胞，對50ml上清進(jìn)行離心收集細(xì)胞，如果細(xì)胞連片狀態(tài)，棄掉上清對收集的細(xì)胞進(jìn)行胰酶消化（1ml胰酶37度），接種培養(yǎng)。

二、懸浮細(xì)胞
1、接收到細(xì)胞，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞 100X,200X 各一張）。
2、用 75%的酒精消毒外包裝,在超凈工作臺(tái)內(nèi)打開外包裝。
3、嚴(yán)格遵循無菌操作規(guī)范，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4、細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴(yán)禁直接傾倒）。
5、1000rpm，5min 離心，用吸管小心吸出上清，加入培養(yǎng)基，重懸細(xì)胞。
6、將重懸好的細(xì)胞轉(zhuǎn)入六孔板或者細(xì)胞培養(yǎng)瓶種，加入新鮮培養(yǎng)基，置于 37℃，5%CO2 培養(yǎng)（大部分細(xì)胞）。