TC-71神經(jīng)外胚層腫瘤細(xì)胞
英文名稱:Human Neuroectodermal Tumor Cells
1) 來源:神經(jīng)外胚層
2) 形態(tài):上皮細(xì)胞樣,貼壁生長(zhǎng)
3) 含量:>1x106 個(gè)/mL
4) 污染:支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性
5) 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝
細(xì)胞接收后的操作流程與注意事項(xiàng):
1、如簽收時(shí)出現(xiàn)培養(yǎng)瓶壁破裂、漏液等情況,請(qǐng)及時(shí)做好照片記錄并聯(lián)系我們。
2、擰松瓶蓋,細(xì)胞瓶豎立培養(yǎng)8h(或到第二天)
3、待細(xì)胞沉底后吸除上層液體(含碎片殘?jiān)?,?qǐng)小心操作),然后吸取沉底的細(xì)胞層(2ml左右)轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶。
4、加入新鮮的*培養(yǎng)基(如細(xì)胞狀態(tài)較差可將血清濃度調(diào)高到15%)繼續(xù)培養(yǎng)。
細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程(請(qǐng)嚴(yán)格遵照無菌操作)
1、將培養(yǎng)瓶/皿中的細(xì)胞重懸混勻。
2、吸取2/3或者一半混勻后的細(xì)胞懸液到新的培養(yǎng)瓶/皿。
3、分別在原瓶/皿和新分瓶的培養(yǎng)瓶/皿加入等量或者2倍的新鮮培養(yǎng)基,使細(xì)胞密度保持5×10(5)/ml左右。
4、注意培養(yǎng)基PH值變化情況和細(xì)胞密度,定期半量換液(每周2-3次),待細(xì)胞密度大于2×10(6)/ml以后重復(fù)1項(xiàng)操作或者凍存。
TC-71神經(jīng)外胚層腫瘤細(xì)胞
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;
4.如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)*的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
TC-1小鼠肺上皮細(xì)胞
細(xì)胞處理方法:
一、貼壁細(xì)胞
1、 接收到細(xì)胞,肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞 100X,200X 各一張)。
2、用 75%的酒精消毒外包裝,在超凈工作臺(tái)內(nèi)打開外包裝。
3、嚴(yán)格遵循無菌操作規(guī)范,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4、37度平衡1-2小時(shí)。
5、用移液管吸取培養(yǎng)基,到50ml離心管中,剩下細(xì)胞密度達(dá)到80%至90%可以傳代,如沒有達(dá)到添加6ml新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
6、如果肉眼檢查上清有細(xì)胞,對(duì)50ml上清進(jìn)行離心收集細(xì)胞,如果細(xì)胞連片狀態(tài),棄掉上清對(duì)收集的細(xì)胞進(jìn)行胰酶消化(1ml胰酶37度),接種培養(yǎng)。
二、懸浮細(xì)胞
1、接收到細(xì)胞,肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞 100X,200X 各一張)。
2、用 75%的酒精消毒外包裝,在超凈工作臺(tái)內(nèi)打開外包裝。
3、嚴(yán)格遵循無菌操作規(guī)范,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4、細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴(yán)禁直接傾倒)。
5、1000rpm,5min 離心,用吸管小心吸出上清,加入培養(yǎng)基,重懸細(xì)胞。
6、將重懸好的細(xì)胞轉(zhuǎn)入六孔板或者細(xì)胞培養(yǎng)瓶種,加入新鮮培養(yǎng)基,置于 37℃,5%CO2 培養(yǎng)(大部分細(xì)胞)。